Page 16 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第9期
·1282 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年9月

myosin light chain phosphorylase（MLCP）in lung. The expression of ROCK1 and ROCK2 in rat lung tissues was measured by Western
blot assay. Results：FDCA alleviated hypoxia⁃induced increments of RVSP and RVHI，as well as cardiomyocytes hypertrophy. In
addition，FDCA suppressed hypoxia⁃induced pulmonary artery wall hypertrophy，pulmonary vessel muscularization and perivascular
fibrosis. ELISA results showed that FDCA inhibited hypoxia ⁃ induced upregulation of IL ⁃ 1β，IL ⁃ 6 and TNF ⁃ α，and restored the
expression of MLCK and MLCP in lung. Moreover，FDCA reversed hypoxia⁃induced upregulation of ROCK1 and ROCK2 in the lung
tissues of HPH rats. Conclusion：FDCA alleviates HPH by inhibiting chronic hypoxia⁃induced pulmonary vascular contraction and
remodeling，as well as suppressing inflammation in lung. These results indicate that FDCA could be a potential compound for treating
HPH.
［Key words］ hypoxic pulmonary hypertension；fasudil dichloroacetate；pulmonary vascular remodeling
［J Nanjing Med Univ，2021，41（09）：1281⁃1288］

肺动脉高压（pulmonary hypertension，PH）是一 究主要目的在于探讨 FDCA 对慢性缺氧诱导的 PH
类由多种病因引起的，以肺动脉压力异常升高，同 大鼠的治疗作用并揭示其潜在机制，为HPH治疗提
时合并不同程度右心功能衰竭为特征的肺血管疾 供新的策略。
病 。PH 在大于 65 岁人群中的患病率高达 10%，
［1］
1 材料和方法
其中低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hyper⁃
tension，HPH）是最为常见的PH类型之一，常见于慢 1.1 材料
［2］
性缺氧（chronic hypoxia，CH）性肺病患者 。目前 清洁级成年健康雄性SD大鼠24只，体重（230 ±
HPH的治疗以原发病的治疗为主，尚无推荐的靶向 20）g，由南京医科大学动物中心提供。本研究所有
药物 ，无法逆转慢性缺氧导致的肺血管重构和肺血 实验操作经由南京医科大学实验动物福利伦理审
［3］
管阻力进行性升高，HPH患者预后仍然较差，因此探 查委员会许可（IACUC⁃2005021）。
索治疗HPH的潜在靶点势在必行。 FDCA（中国药科大学天然药物国家重点实验
研究表明，针对多靶点联合用药已成为治疗PH 室制备），实验动物缺氧箱（杭州艾普仪器设备有限
的重要方向。ROCK 信号通路是目前研究 PH 发病 公司），RIPA 裂解液、BCA 检测试剂盒（上海碧云天
机制的热点之一。ROCK选择性抑制剂法舒地尔是 生物技术有限公司），大鼠白介素（interleukin，IL）⁃
一种细胞内钙离子拮抗剂，可阻断肌球蛋白轻链磷 1β、IL⁃6、肿瘤坏死因子⁃α（tumor necrosis factor⁃α，
酸化，抑制血管收缩、痉挛，被用于治疗蛛网膜下腔 TNF⁃α）ELISA 试剂盒（武汉华美生物工程有限公
［4］
出血后脑血管痉挛、冠状动脉疾病等 ，在不同 PH 司），肌球蛋白轻链激酶（myosin light chain kinase，
实验动物模型中均有降低肺动脉压力、抑制肺动脉 MLCK）ELISA试剂盒、肌球蛋白轻链磷酸化酶（myo⁃
重塑的功能 ［5-6］ ，近期一项临床研究表明，法舒地尔 sin light chain phosphorylase，MLCP）ELISA 试剂盒
［7］
在重度PH患者中也具有良好的治疗效果 。此外， （南京翼飞雪生物科技有限公司），β⁃actin、ROCK1、
丙酮酸脱氢酶激酶（pyruvate dehydrogenase kinase， ROCK2抗体（Proteintech公司，美国）。
PDK）信号通路也是PH研究的关注重点。PDK抑制 1.2 方法
剂二氯乙酸盐（dichloroacetate，DCA）可活化细胞表 1.2.1 HPH动物模型的建立及给药方案
面 Kv1.5 通道，减少钙离子内流，抑制细胞收缩、增 SD大鼠随机分为4组：对照组（CON组）、CON+
殖，同时可抑制 PDK 恢复丙酮酸脱氢酶活性，改善 FDCA组、CH组、CH+FDCA组，每组6只。将CH组及
［8］
线粒体能量代谢，维持细胞正常生理功能 ，临床上 CH+FDCA组大鼠置于常压低氧箱中，舱内氧气浓度
主要用于治疗乳酸性酸中毒和代谢性疾病，也可用 维持在（10.0 ± 0.1）%，同时放置钠石灰吸收 CO2，变
［9］
于抑制野百合碱诱导的大鼠肺血管重构 ，目前已 色硅胶吸收水蒸气。每天开箱 1 h 更换饮用水、饲
进入临床研究阶段 ［10］ 。基于法舒地尔和DCA在PH 料、垫料、钠石灰与变色硅胶，其余时间均保持低氧
动物模型及患者中的治疗作用，我们发现法舒地尔 环境。CON 组与 CON+FDCA 组置于正常环境中。
盐酸盐解离出的游离胺基可以和二氯乙酸结合形 缺氧第 15 天开始，CON+FDCA 组及 CH+FDCA 组予
成一种新型水溶性口服盐类化合物——法舒地尔 FDCA（43.3 mg/kg）灌胃治疗，CON 及 CH 组予等体
［11］
二氯乙酸盐（fasudil dichloroacetate，FDCA） 。本研 积生理盐水，每天1次，于开箱 1 h内完成，持续14 d。