Page 74 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第9期
·1340 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年9月

A B 10 C
（ ×10 5 ） 8 6 y=0.224x+0.170
2
R =0.998
荧光强度 4 2 0

-2 0 10 20 30 40
细胞数（×10）
5

D E F
100 ** 100 T cell 80 T cell ***
（ % ） 80 ** * （ % ） 80 CD19⁃CART *** （ % ） 60 CD19⁃CART
***
60
细胞杀伤 40 ** Raji⁃luc 细胞杀伤 40 ** Malme⁃3M⁃CD19⁃luc 细胞杀伤 20 0 **
40
60
***
20
20
0 -20 0 -20
0 1∶1 5∶1 10∶1 20∶1 5∶1 10∶1 20∶1 5∶1 10∶1 20∶1
效靶比 效靶比 效靶比
A：用萤火虫荧光素酶法，将表达荧光素酶基因的Raji⁃luc靶细胞设置不同的数量，使用活体成像仪检测荧光强度；B：用检测到的荧光强
度与对应的细胞量做标准曲线；C：CD19⁃CART细胞对Raji⁃luc靶细胞的杀伤实验，用活体成像仪检测拍照；D：杀伤结果数据作图（n=3，统计方
法为单因素方差分析后LSD法多重比较，两组比较，P < 0.05，P < 0.01）；E：使用荧光素酶法用多功能酶标仪检测CD19⁃CART细胞对悬浮细
**
*
胞Raji⁃luc的杀伤实验结果，每个效靶比条件下的CD19⁃CART与对照T细胞的杀伤效率均具有显著性差异；F：使用荧光素酶法用多功能酶标
仪检测CD19⁃CART细胞对贴壁细胞Malme⁃3m⁃CD19⁃luc的杀伤实验结果，每个效靶比条件下的CD19⁃CART与对照T细胞的杀伤效率均具有
显著性差异（E、F的统计方法为Student⁃t检验，n=3，两组比较，P < 0.05，P < 0.01， P＜0.001）。
*
***
**
图2 萤火虫荧光素酶法对靶细胞为悬浮细胞或贴壁细胞的杀伤实验
悬浮细胞或贴壁细胞的情况下都可以用来检测杀 ［6］ FOTAKIS G，TIMBRELL J A. In vitro cytotoxicity assays：
伤效率。 Comparison of LDH，neutral red，MTT and protein assay
in hepatoma cell lines following exposure to cadmium
［参考文献］
chloride［J］. Toxicol Lett，2006，160（2）：171-177
［1］ KALOS M，LEVINE B L，PORTER D L，et al. T cells with
［7］ ESSER R，MULLER T，STEFES D，et al. NK cells engi⁃
chimeric antigen receptors have potent antitumor effects
neered to express a GD2⁃specific antigen receptor display
and can establish memory in patients with advanced leu⁃
built⁃in ADCC⁃like activity against tumour cells of neuro⁃
kemia［J］. Sci Transl Med，2011，3（95）：95ra73
ectodermal origin［J］. J Cell Mol Med，2012，16（3）：569-
［2］ GRUPP S A，KALOS M，BARRETT D，et al. Chimeric an⁃
581
tigen receptor⁃modified T Cells for acute lymphoid leuke⁃
［8］ LI L，LIU L N，FELLER S，et al. Expression of chimeric
mia［J］. N Engl J Med，2013，368（16）：1509-1518
antigen receptors in natural killer cells with a regulatory⁃
［3］ KOCHENDERFER J N，DUDLEY M E，KASSIM S H，et
compliant non⁃viral method［J］. Cancer Gene Ther，2010，
al. Chemotherapy⁃refractory diffuse large B⁃cell lympho⁃
17（3）：147-154
ma and indolent B ⁃ cell malignancies can be effectively
［9］ MARCUSSON⁃STÅHL M，CEDERBRANT K. A flow⁃cy⁃
treated with autologous T cells expressing an anti⁃CD19
chimeric antigen receptor［J］. J Clin Oncol，2015，33（6）： tometric NK⁃cytotoxicity assay adapted for use in rat re⁃
peated dose toxicity studies［J］. Toxicology，2003，193
540-549
（3）：269-279
［4］ SCHUSTER S J，SVOBODA J，CHONG E A，et al. Chime⁃
［10］ GILLISSEN M A，YASUDA E，DE JONG G，et al. The
ric antigen receptor t cells in refractory B⁃cell lymphomas
［J］. N Engl J Med，2017，377（26）：2545-2554 modified FACS calcein AM retention assay：a high
［5］ TASSEV D V，CHENG M，CHEUNG N K V. Retargeting throughput flow cytometer based method to measure cyto⁃
NK92 cells using an HLA⁃A2⁃restricted，EBNA3C⁃specific toxicity［J］. J Immunol Methods，2016，434：16-23
chimeric antigen receptor［J］. Cancer Gene Ther，2012， ［11］ LIU D F，SONG L P，BRAWLEY V S，et al. Medulloblas⁃
19（2）：84-100 toma expresses CD1d and can be targeted for immunother⁃