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第41卷第9期         乌兰托雅，李睿亚. 纳米微针导入大豆提取液联合调Q1064 nm激光对黄褐斑豚鼠模型表皮
                  2021年9月          黑素细胞的影响［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（09）：1342-1347，1353               ·1343 ·


                奥森），Olympus 光学显微镜（Olympus 公司，日本），                 分，组织切碎待用。按说明书配制实验试剂，分别
                CMIAS 多功能真彩色病理图像分析系统（空总医院                         用羟胺法及硫代巴比妥酸测定。
                与北航大学共同研制）。                                           免疫组化检测 Melan A：石蜡切片脱蜡至水，抗
                1.2  方法                                           原修复阻断内源性过氧化氢酶，一抗 Melan A 抗体
                1.2.1 实验动物分组                                      4 ℃过夜孵育，二抗山羊抗兔 IgG 抗体室温孵育，
                    60 只豚鼠随机抽取 12 只，作为 A 组（空白对照                   DAB显色，苏木素复染，不同浓度梯度乙醇脱水，二
                组），不造模，不治疗；剩余 48 只为 B 组（模型制备                      甲苯透明，封片。
                组）。造模 45 d，随机分为 4 组：分别为 B1 组（模型                       MC相关数据：显微镜物镜下，每张片随机选择
                对照组）不治疗；B2 组（激光治疗组）相同参数激光                         不同视野，用病理图像分析系统对黑素阳性目标图
                治疗，每周 1 次，治疗 5 次；B3 组（大豆治疗组）纳晶                    像采集、存储、定量分析，记录各组不同时期 MC 阳
                促渗仪导入大豆提取液，每日 1 次，治疗 5 周；B4 组                     性目标数量。
               （大豆联合激光组）两种方式联合治疗。                                 1.3  统计学方法
                1.2.2 黄褐斑豚鼠模型制备                                       使用SPSS22.0对各组数据进行统计分析，计量
                                  ［8］
                    脱毛采用上蜡法 ，豚鼠背部脱毛范围约4 cm×                       资料以均数±标准差（x ± s）表示，经检验均符合正态
                                                           ［9］
                                        ［7］
                4 cm。采用“紫外线照射法 ”+“黄体酮冲击法 ”                        分布，采用方差分析进行比较，组间比较采用LSD⁃t
                制备模型，豚鼠置于固定笼内，与光源的距离为                             检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
                20 cm，连接电源打开 SH2B 紫外线光疗仪，每日照
                                                                  2  结 果
                射1次，每次30 min，连续45 d。黄体酮注射液配置
                成安全剂量 2 mL/kg，豚鼠后肢消毒后肌肉注射，每                       2.1  各组表观指标变化
                日1次，双后肢交替注射，连续45 d。                                   造模后 B1、B2、B3、B4 组背部造模区域出现不
                1.2.3 模型治疗                                        规则形的黑褐色斑片，与A组对比鲜明，提示造模成
                    调 Q1064 nm 激光：波长 1 064 nm，光斑 8 mm，            功。A 组、B1 组在治疗前、治疗 1 周即刻、治疗 5 周
                                2［10-11］
                能量密度1~2 J/cm        ，助手固定好豚鼠治疗区域，                 即刻、治疗结束3周未见明显变化。
                在治疗区域从左至右均匀扫描2遍，光斑重叠不超过                               治疗后 B4 组色斑基本消退，B4 组治疗区域近
                10%，皮肤轻微发红停止治疗，每周1次，治疗5次，每                        似于A组背部皮肤，疗效明显，B2、B3组可见散在分
                次约1 min。                                          布色斑，颜色较前变浅。各组治疗结束 3 周均未出
                    纳米微针导入方法：清洁豚鼠治疗区域，纳米晶                         现色沉及复发（图1）。
                片安装在纳晶促渗仪头部，将大豆提取液（20 mg/mL）                      2.2  各组皮肤CT结果
                垂直滴于纳米晶片上，开启电源，在治疗区域从左                                与 B1 组相比，B4 组的 MC 和黑素颗粒显著减
                至右平行滑动且垂直按摩2遍，每日1次，治疗5周。                          少，B2、B3 组的 MC 和黑素颗粒也减少。治疗结束
                1.2.4 取材                                          后，B2、B3、B4组豚鼠的表皮较治疗前变薄，颗粒层
                    在造模后（治疗前）、治疗1周即刻、治疗5周即                        含少量黑素颗粒，基底层黑素含量显著降低，可见
                刻、治疗结束3周取材。取材前1 d脱毛，豚鼠腹腔注                         散在分布的MC，黑素颗粒显著减少，偶可见树枝状
                                                        ［12-14］
                射10%水合氯醛水溶液（安全剂量0.3 mL/100g                ），     细胞，真皮浅层可见少许黑素颗粒（图2）。
                麻醉 15 min 后，助手固定好豚鼠，用无菌手术器械                       2.3  各组皮肤SOD活力、MDA含量的变化
                迅速在皮损处取适量的皮肤组织。                                       B2、B3、B4组治疗前、后，SOD活力及MDA含量
                1.2.5 各项指标观测                                      均有差异（P＜0.05），说明 3 组治疗方法均有疗效。
                    表观指标：观察豚鼠背部实验区域皮肤的变                           通过方差分析，两两组间比较均有差异（P＜0.05），
                化，如色斑颜色深浅、面积大小、毛发光泽度。                             B4组联合治疗疗效最显著（表1、2）。
                    皮肤CT：取材前用皮肤CT逐层扫描治疗区域皮                        2.4  各组Melan A免疫组化结果

                肤，观察表、真皮变化，特别是表皮黑素细胞（melano⁃                          B1组镜下可见阳性MC、黑素颗粒较多，呈强阳
                cyte，MC）、黑素颗粒等。                                   性反应；基底细胞层可见分布密集的阳性 MC，MC
                    皮肤 SOD 活性、MDA 水平的测定：豚鼠背部皮                     胞体及胞核较大，伴核上移；基底细胞层以上可见
                肤取约5 mg组织，用4 ℃生理盐水冲洗，滤纸吸去水                        大量呈线状或带状致密的黑素颗粒，着色较深。
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