Page 11 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第11期 张成霖，方 斌，刘晓蕊，等. 利用CRISPR/Cas9技术构建ACE2基因修饰的猪胎儿成纤维细胞系［J］.
2022年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（11）：1499-1506 ·1503 ·

A E1 E2 E3 E4 E5 E6 E7 E8 E9 E10 E11 E12 E13 E 14 E15 E16 E17 E18
5′ 3′

3′ GGACGAGTCTTTACCTCGATTAC 5′
B pX330_ACE2测序结果 C M 1 2 3 4
2 000 bp
1 000 bp
750 bp
500 bp
250 bp
100 bp

pBR322_ori
U6⁃promoter
AmpR promoter Amp ACE2_sgRNA
tracrRNA
f1ori CBh promoter

AAV2 ITR 3xFLAG
pX330_ACE2
bGH poly（A）signal SV40 NLS
8 509 bp
nucleoplasmin NLS

Cas9
D E
pUC57_ARM⁃2A部分测序结果 pX330_sf测序结果
60 70 80 90 290 300 310 320 330

sgRNA sf
LA
AmpR promoter
GSG linker
P2A pBR322_ori
U6⁃promoter
AmpR
AmpR promoter Amp sf_sgRNA
tracrRNA
ori CBh promoter
f1
AAV2 ITR 3xFLAG
pUC57_ARM⁃2A pX330_sf
bGH poly（A）signal SV40 NLS
4 525 bp nucleoplasmin NLS 8 508 bp
chimeric CDS
Ori

sgRNA sf
Cas9
RA
pA
A：长白猪ACE2基因靶点示意图；B：打靶载体pX330_ACE2图谱和测序结果；C：T7E1酶切验证突变效率：1是加入T7E1酶的野生型基因
组，2是加入T7E1 酶的ACE2编辑基因组，3是没有加入T7E1 酶的ACE2编辑基因组，4是加入T7E1酶的空白对照组；D：ACE2嵌合基因敲入
载体图谱和部分测序结果；E：打靶载体pX330_sf图谱和测序结果。
图3 载体的构建和剪切效率验证
Figure 3 Construction of the vector and verification of shearing efficiency