Page 14 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第11期
·1506 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年11月

易感的鸡 ACE2 序列 ［18］ ，构建大鼠/鸡嵌合 ACE2 基 jor cell entry receptor for SARS⁃CoV⁃2［J］. Lung，2020，
因，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将嵌合ACE2基 198（6）：867-877
因整合到猪ACE2基因的第10号外显子上。利用猪 ［7］ PICKERING B S，SMITH G，PINETTE M M，et al. Sus⁃
内源的 ACE2 基因启动子和 2A 肽序列来表达嵌合 ceptibility of domestic swine to experimental infection
with severe acute respiratory syndrome coronavirus 2［J］.
的ACE2基因，同时实现了猪内源ACE2基因的敲除
Emerg Infect Dis，2021，27（1）：104-112
和嵌合ACE2基因的敲入。
［8］ 汪娅媛，田仰清，严 涵，等. 新型冠状病毒及其受体
本研究利用短同源臂（40 bp）来构建ACE2基因 ACE2在犬猫上的研究［J］. 上海畜牧兽医通讯，2021（3）：
敲入供体，转染后获得 19 个抗性的猪 PFF 细胞克 6-9
隆，其中 4 个为阳性单细胞克隆（即嵌合的 ACE2 基 ［9］ YAN R，ZHANG Y，LI Y，et al. Structural basis for the
因整合到猪内源的ACE2位点），基因敲入效率高达 recognition of SARS⁃CoV⁃2 by full⁃length human ACE2
21%。以上结果显示，短同源臂的供体简化了载体 ［J］. Science，2020，367（6485）：1444-1448
构建过程，而且不会降低基因敲入效率。 ［10］ LI Z，YANG H Y，WANG Y，et al. Generation of trypto⁃
由于 ACE2 基因在猪的 PFF 细胞中不表达，本 phan hydroxylase 2 gene knockout pigs by CRISPR/Cas9⁃
mediated gene targeting［J］. J Biomed Res，2017，31（5）：
研究没有对 ACE2 编辑的 PFF 细胞克隆进行 ACE2
445-452
的表达检 测 和 功 能 验 证 。 本 研 究 设 计 的 嵌 合
［11］ 曾华沙，姚 俊，王红顺，等. 人/猪OSBPL2同源性比较
ACE2 是否能在猪体内发挥正常的生理功能和降
及猪 PFFs 靶基因敲除细胞系的建立［J］. 南京医科大
低猪对 SARS⁃CoV⁃2 的易感性，还需要通过体细胞
学学报（自然科学版），2018，38（2）：149-154
核移植获得 ACE2 编辑的克隆猪后，开展实验来进 ［12］ PRAHARAJ M R，GARG P，KESARWANI V，et al. SARS
行研究探讨。 ⁃CoV⁃2 spike glycoprotein and ACE2 interaction reveals
综上，本研究首次在猪PFF细胞中利用CRISPR/ modulation of viral entry in wild and domestic animals
Cas9 技术实现了外源 ACE2 基因的定点整合，成功 ［J］. Front Med（Lausanne），2021，8：775572
建立了 ACE2 基因编辑的长白猪 PFF 细胞系，为 ［13］ WANG R G ，RUAN M M，ZHANG R J，et al. Antigeni⁃
SARS⁃CoV⁃2 不易感猪模型的构建提供了重要的实 city of tissue and organs from GGTA1/CMAH/β4GalNT2
triple gene knock pigs［J］. J Biomed Res，2019，33（4）：
验材料。
235-243
［参考文献］ ［14］ 刘思远，卢 丹，唐中林. CRISPR/Cas9 技术及其在猪

基因编辑中的应用［J］. 畜牧兽医学报，2020，51（3）：
［1］ LI W，MOORE M J，VASILIEVA N，et al. Angiotensin⁃
converting enzyme 2 is a functional receptor for the SARS 409-416
［15］ PRATHER R S，WHITWORTH K M，SCHOMMER S K，
coronavirus［J］. Nature，2003，426（6965）：450-454
et al. Genetic engineering alveolar macrophages for host
［2］ CAO Y，SU B，GUO X，et al. Potent neutralizing antibo⁃
resistance to PRRSV［J］. Vet Microbiol，2017，209：124-129
dies against SARS⁃CoV⁃2 identified by high⁃throughput
single⁃cell sequencing of convalescent patients’B cells ［16］ WHITWORTH K M，LEE K，BENNE J A，et al. Use of the
［J］. Cell，2020，182（1）：73-84 CRISPR/Cas9 system to produce genetically engineered
［3］ 蒋潘虹，阮嘉雯，俞慕华，等. 新型冠状病毒（SARS⁃CoV pigs from in vitro⁃derived oocytes and embryos［J］. Biol
⁃2）变异的研究进展［J］. 中国人兽共患病学报，2022， Reprod，2014，91（3）：78
38（2）：157-164 ［17］ ZHU P，ZHANG W，FENG F，et al. Role of angiotensin⁃
［4］ ADIL M T，RAHMAN R，WHITELAW D，et al. SARS⁃ converting enzyme 2 in fine particulate matter ⁃ induced
acute lung injury［J］. Sci Total Environ，2022，825：
CoV⁃2 and the pandemic of COVID⁃19［J］. Postgrad Med
153964
J，2021，97（1144）：110-116
［5］ 刘 玲，陈晓聪，宣 焱，等. 新冠病毒受体蛋白 ACE2 ［18］MEEKINS D A，GAUDREAULT N N，RICHT J A. Natu⁃
结构与功能的生信分析及原核表达［J/OL］. 中国免疫 ral and experimental SARS⁃CoV⁃2 infection in domestic
学杂志，2021［2022⁃01⁃01］. https：//kns.cnki.net/kcms/ and wild animals［J］. Viruses，2021，13（10）：1993
［收稿日期］ 2022-05-24
detail/22.1126.R.20211129.1310.006.html
（本文编辑：陈汐敏）
［6］ SCIALO F，DANIELE A，AMATO F，et al. ACE2：The ma⁃