Page 18 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第11期
·1510 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年11月

和对照（DMSO）组细胞均为单层贴壁生长，呈现卵 （DMSO）组细胞活力仅有轻微降低，各个时间点之
圆形或鹅卵石外观，边界清楚，胞浆丰富，细胞核清 间差异无统计学意义（P > 0.05，图 1B）。随着染毒
晰。实验组整体细胞密度较对照组减低，实验组小 时间的延长，各实验组各时间点细胞活力依次降
部分细胞胞浆内出现空泡状结构，细胞变大且结构 低，各时间点细胞活力相互之间的差异均有统计学意
松散，细胞核增大。 义（P < 0.05）。上述结果表明 DEHP 可抑制 HCAEC
2.2 DEHP抑制HCAEC的增殖 的增殖能力，并且染毒时间越长、DEHP 浓度越高，
CCK⁃8 法观察 DEHP 对 HCAEC 增殖能力的影 毒性作用越明显，具有时间和浓度依赖性。
响。对DEHP浓度及染毒时间分别进行了单独效应 2.3 DEHP抑制HCAEC血管形成能力
检测。染毒12 h时，与对照（DMSO）组相比，实验组 体外成管实验能够在一定程度上模拟血管发
的细胞活力差异无统计学意义（P > 0.05）。染毒时 生过程，通过观察细胞形成管腔的情况，评估DEHP
间为24、48、72 h时，与对照（DMSO）组相比，实验组 对 HCAEC 血管形成能力的影响。对照（DMSO）组
各浓度 DEHP（128、256、384、512 μmol/L）均能够抑 细胞多呈现为拉长的梭形，互相连接成网状，形成
制细胞的增殖能力（P < 0.05，图 1B），随着 DEHP 浓 的管状结构在 6 h 时趋于稳定，随着时间的延长逐
度的增加，细胞活力依次降低，且 DEHP 128、256、 渐崩解。实验组细胞多呈现孤立的圆形、卵圆形，
384、512 μmol/L组细胞活力相互之间的差异均有统 散乱分布在视野中（图 2A）。与对照（DMSO）组相
计 学 意 义（P < 0.05）。 随 着 时 间 的 延 长 ，对 照 比，DEHP 128 μmol/L组形成的交点数目减少，但是

A DEHP（μmol/L）
DMSO组 128 256 384 512

B
1.5 ▲ DMSO
△ △ △▲ DEHP 128 μmol/L
#
#
（ % ） 1.0 一一一一 * # * * * * # # # △▲ DEHP 256 μmol/L
#
#
# △ △
*
* # △▲
*
*
*
DEHP 384 μmol/L
* * # △
*
细胞活力 0.5 一一一一 一一一一 * * * * # 一一一一
* * *
DEHP 512 μmol/L
* *
一一一一
一一一一 一一一一
一一一一 *
一一一一 一一一一 一一一一 一一一一
一一一一 一一一一 一一一一 一一一一
0 一一一一 一一一一
12 h 一一一一 一一一一 72 h
48 h
24 h
一一一一 一一一一
A：HCAEC 暴露于不同浓度 DEHP（128、256、384、512 μmol/L）72 h 后的细胞形态学观察（×40）；B：HCAEC 暴露于不同浓度 DEHP（128、
*
#
**
256、384、512 μmol/L）、不同时间（12、24、48、72 h）后细胞增殖能力的情况，与同时间点DMSO组比较，P < 0.05，P < 0.01；与12 h组比较，P <
0.05；与24 h组比较，P <0.05；与48 h组比较，P <0.05（n=3）。
▲
△
图1 DEHP暴露对HCAEC细胞形态和增殖能力的影响
Figure 1 Effects of DEHP exposure on cell morphology and proliferation of HCAEC
差异无统计学意义（P > 0.05）。DEHP 256、384、 Western blot 实验结果显示，与对照组 Bcl⁃2 表达水
512 μmol/L 组形成交点数目进一步减少，与对照 平相比，各实验组Bcl⁃2表达水平降低，差异有统计
（DMSO）组 相 比 ，差 异 有 统 计 学 意 义（P < 0.01， 学意义（P < 0.05，图 3C、D）；与对照（DMSO）组 BAX
图 2B）。以上结果说明 DEHP 可以抑制 HCAEC 的 表达水平相比，DEHP 128 μmol/L 组 BAX 表达水平
血管形成能力，具有浓度依赖性。 降低，但是其差异无统计学意义（P > 0.05）。DEHP
细胞凋亡是由基因控制的细胞自主有序的死 256、384、512 μmol/L 组 BAX 表达水平增加，差异有
亡，为了评价 DEHP 对 HCAEC 凋亡的影响，进行了 统计学意义（P < 0.05）；与对照（DMSO）组 cleaved
细胞流式实验。与对照（DMSO）组相比，各实验组 Caspase⁃3/Caspase⁃3比值相比，各实验组比值上升，
凋亡细胞比例增加，差异具有统计学意义（P < 0.05， 差异具有统计学意义（P < 0.05）。以上结果说明
图 3A、B）。后续检测了凋亡相关蛋白的表达水平， DEHP 可以改变凋亡相关蛋白的表达水平，诱导