Page 20 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第11期
·1512 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年11月
A DMSO组 DEHP 128 μmol/L DEHP 256 μmol/L
10 7 10 7 10 7
Q1 Q2 Q1 Q2 Q1 Q2
6
6
10 2.21% 3.50% 10 1.16% 2.85% 10 1.32% 2.85%
6
10 5 10 5 10 5
PI 10 4 PI 10 4 PI 10 4
10 3 10 3 10 3
0 Q4 Q3 0 Q4 Q3 0 Q4 Q3
-10 92.9% 1.43% -10 89.1% 6.93% -10 88.4% 7.39%
3
3
3
3
3
6
5
4
3
6
5
4
5
4
6
3
-10 0 10 10 10 10 10 7 -10 0 10 3 10 10 10 10 7 -10 0 10 3 10 10 10 10 7
Annexin⁃V Annexin⁃V Annexin⁃V
B
DEHP 384 μmol/L DEHP 512 μmol/L 20 ***
10 7 10 7
Q1 Q2 Q1 Q2
***
6
6
10 1.11% 3.40% 10 1.49% 3.5%1 （ % ） 15
10 5 10 5 10 *** ***
PI 10 4 PI 10 4 凋亡率
5
10 3 10 3
0 Q4 Q3 0 Q4 Q3 0
-10 83.6% 11.9% -10 80.4% 14.6%
3
3
DMSO 128 256 384 512
3
4
5
6
5
6
3
4
3
-10 0 10 10 10 10 10 7 -10 0 10 3 10 10 10 10 7 DEHP（μmol/L）
Annexin⁃V Annexin⁃V
C D
DEHP（μmol/L） DMSO
DMSO 128 256 384 512 1.5 *** DEHP 128 μmol/L
蛋白相对表达量 *** *** *** ** 一一一一
Bcl⁃2 26 kDa 一一一一 DEHP 256 μmol/L
BAX 21 kDa 1.0 * *** * ** ** 一一一一 DEHP 384 μmol/L
一一一一
DEHP 512 μmol/L
一一一一
caspase⁃3 32 kDa 0.5 * 一一一一 一一一一
cleaved Caspase⁃3 17 kDa 一一一一 一一一一 一一一一
一一一一
一一一一
GAPDH 36 kDa 0 一一一一 一一一一
一一一一
Bcl⁃2 一一一一 BAX cleaved caspase⁃3/caspase⁃3
一一一一
A：HCAEC暴露于不同浓度DEHP（128、256、384、512 μmol/L）后凋亡情况；B：流式细胞实验中各组凋亡率比较；C：HCAEC暴露于不同浓
* **
度 DEHP（128、256、384、512 μmol/L）后凋亡相关蛋白 Western⁃blot 结果图；D：凋亡相关蛋白相对表达量。与 DMSO 组比较，P < 0.05，P <
0.01， P < 0.001（n=3）。
***
图3 DEHP暴露对HCAEC凋亡及凋亡相关蛋白表达情况的影响
Figure 3 Effects of DEHP exposure on apoptosis and the expression of apoptosis⁃related proteins in HCAEC
对HCAEC的影响及可能机制。 （p⁃AKT）可以进一步调节下游信号，如Bcl⁃2家族蛋
内皮细胞是心肌血管的重要组成部分，是血管 白（如Bcl⁃2、BAX）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族
［29-30］
快速新生和维持内皮层完整性的基础 ［26］ 。CCK⁃8结 蛋白（如 Caspase⁃3） 。Caspase⁃3 在多条凋亡信
果表明，DEHP 能够以时间和剂量依赖的方式抑制 号转导通路中发挥重要作用。Caspase⁃3 以酶原形
HCAEC 增殖能力。体外成管实验中，6 h 时实验组 式存在于细胞质中，在细胞凋亡的早期被剪切激
交点数目比对照组减少，而染毒时间≤12 h 实验组 活，剪切的 Caspase⁃3（cleaved Casepase⁃3）会引起一
和对照组增殖能力差异无统计学意义，说明 DEHP 系列的级联反应，激活核酸内切酶，分解DNA片段，
可以在不影响增殖的情况下对 HCAEC 血管形成能 最终诱导细胞凋亡。Bcl⁃2和Bax 是Bcl⁃2家族成员
力产生抑制。 中的一对凋亡调控基因，参与细胞线粒体凋亡途径
Western blot 结果显示实验组和对照组 PI3K、 的调控机制。Bax 和 Bcl⁃2 主要作用于线粒体膜。
AKT 差异无统计学意义。DEHP 浓度≥256 μmol/L Bax 是一种促凋亡基因，可促进线粒体释放细胞色
时，实验组p⁃PI3K/PI3K、p⁃AKT/AKT较对照组降低， 素 C，从而促进细胞凋亡。Bcl⁃2 是一种抗凋亡基
差异有统计学意义，说明DEHP可降低PI3K/AKT信 因，可以抑制细胞色素C的释放，并拮抗Bax的促凋
号通路关键蛋白的磷酸化。生理情况下 PI3K 的激 亡作用 ［31-32］ 。本研究结果显示，与对照（DMSO）组相
活可以磷酸化和激活AKT，通过与其PH域结合，导 比，实验组Bcl⁃2降低，同时BAX 和cleaved Caspase⁃
致AKT移位到细胞膜的内表面 ［27-28］ 。磷酸化的AKT 3/Caspase⁃3 增加，与对照组差异有统计学意义（P <
