Page 16 - 南京医科大学学报自然科学版
P. 16

第42卷第11期
               ·1508 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年11月


              cleaved Caspase⁃3/Caspase⁃3 increased（P < 0.05）. And the ratio of p⁃PI3K/PI3K and p⁃AKT/AKT were lower than those in the control
              group（P < 0.05）when DEHP≥256 μmol/L. Conclusion：DEHP can induce apoptosis and inhibit the proliferation and angiogenesis of
              HCAECs by inhibiting PI3K/AKT/ signal pathway.
             ［Key words］ DEHP；human coronary artery endothelial cell；apoptosis；PI3K/AKT
                                                                           ［J Nanjing Med Univ，2022，42（11）：1507⁃1514］



                                                                                             ［14］
                  邻苯二甲酸二（2⁃乙基己基）酯［di（2⁃ethylhex⁃                年人群冠状动脉粥样硬化的风险 。
              yl）phthalate，DEHP］是一种邻苯二甲酸酯类，因其弹                       磷 脂 酰 肌 醇 3 ⁃ 激 酶/蛋 白 激 酶 B（phosphati⁃
              性高、可塑性强，常被用作增塑剂添加于各种聚氯                            dylinositol⁃3⁃kinase/protein kinase B，PI3K/AKT）信号
              乙烯产品中，如医疗器械、药品和食品容器、儿童玩具                          通路存在于所有哺乳动物细胞中，并受细胞外信
                                                         ［1］
              和工业塑料等，以提高产品的柔韧性和耐久性 。                            号的调控，对维持细胞正常功能起着至关重要的
              DEHP以非共价化学键与聚氯乙烯结合，在温度、使                          作用  ［15-16］ 。PI3K的激活可以磷酸化AKT，磷酸化的
              用时间和 pH 值等外部条件变化时，它可以不断地                          AKT（p⁃AKT）可以进一步激活下游靶点调节细胞存
              从产品中解离，污染水、食物、土壤、植物和沉积物                           活，包括Bcl⁃2家族蛋白（如Bcl⁃2、BAX）和半胱氨酸
              等 。DEHP 可经多种途径进入人体，如口鼻吸入、                         天冬氨酸蛋白酶家族蛋白（如 Caspase⁃3） 。鉴于
                ［2］
                                                                                                     ［17］
              直接经口食入、皮肤吸收和在医疗活动中直接进入                            内皮细胞在血管中的重要地位，用不同剂量 DEHP
                        ［3］
              循环系统等 。DEHP具有疏水亲脂性，易从聚氯乙                          处理人冠状动脉内皮细胞（human coronary artery
              烯产品渗入至含脂肪类食物、含有脂质的溶液等，接                           endothelial cell，HCAEC），通过凋亡、血管形成等实
                                       ［4］
              触血液后更容易转移至血液 。因此，在接受塑料材                           验观察其对 HCAEC 功能的影响，并初步探索 PI3K/
              料的侵入性医治（包括体外循环、体外膜肺氧合、透析                          AKT信号通路在DEHP致HCAEC损伤中的作用。
              和输血治疗）后，可以观察到患者体内DEHP水平升
                                                                1  材料和方法
              高。如接受输血治疗的成年人血液内DEHP浓度上
              升，为72.5~295.2 μg/mL（相当于185~755 μmol/L） 。          1.1  材料
                                                         ［5］
              DEHP 及其代谢产物进入人体后会对内分泌系统、                               HCAEC（武汉 Fine Text 公司）。Dulbecco 改良
              生殖系统、呼吸系统、神经系统等多个系统器官产                            Eagle 培 养 基（Dulbecco’s Modified Eagle Medium，
                        ［1］
              生毒性作用 。多项流行病学调查研究表明 DEHP                          DMEM）、胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）、青霉素
              可以扩散到心脏，对心脏节律和心肌细胞产生影                             和链霉素（Gibco公司，美国）。DEHP（Sigma⁃Aldrich
              响，尚未有研究关注 DEHP 对心脏的滋养血管即心                         公司，美国）。CCK⁃8试剂和Annexin V⁃FITC/PI凋亡
              肌血管的影响      ［1，5-6］ 。                             检测试剂盒（南京诺维赞公司）。抗 p⁃PI3、PI3K、
                  心肌血管是滋养心肌的血管，负责心肌中氧合                          p⁃AKT、AKT 抗体（Cell Signaling Technology 公司，美
              血液和去氧血液的有效输送和排出 。所有心肌血                            国），抗 BAX、Bcl⁃2、cleaved Caspase⁃3、Caspase⁃3、
                                             ［7］
              管内衬一层单层、极性排列的内皮细胞，该层内皮                            GAPDH 抗体（上海艾比马特公司）。二甲基亚砜
              细胞参与多种生理功能，如调节新血管形成、维持                            （dimethyl sulfoxide，DMSO）（北京索莱宝公司）。磷
              血管舒张性、维持血液流动性、调节血管壁通透性、抑                          酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂（Roche 公司，瑞士）。
              制血管中促炎因子和凝血因子的激活等                  ［8-9］ 。内皮细     Matrigel基质胶（Corning公司，美国）。
              胞功能异常导致多种并发症，如凝血增强、细胞黏                            1.2  方法
              附、炎症激活、脂蛋白跨内皮运输及血管异常收缩                            1.2.1 细胞培养及DEHP染毒
              和舒张等    ［10］ 。细胞凋亡是受到生物体严格调控的                          向高糖 DMEM 中加入 FBS 和青霉素⁃链霉素双
              程序性死亡，能够维持各种组织和器官的稳定                       ［11］ 。  抗，使 FBS 和青霉素⁃链霉素双抗的终浓度分别为
              血管内皮细胞长期暴露在各种循环应激源的作用                             10%和 1%，配制完全培养基。HCAEC 用完全培养
              下，必须在凋亡和存活之间保持平衡，以保持内皮                            基培养接种于无菌培养皿中，置于细胞培养箱常规
              的完整性    ［12］ 。在病理条件下，内皮细胞凋亡是动脉                    培养，设定温度在 37 ℃，CO2浓度在 5%，每 2 d 更换
              粥样硬化的始动步骤，将导致随后的动脉粥样硬化                            1 次培养基。DEHP染毒实验，选取生长良好处于对
              发生发展    ［13］ 。已有研究表明DEHP暴露可以增加老                   数生长期的细胞，以DMSO为阴性对照组，实验组参
   11   12   13   14   15   16   17   18   19   20   21