Page 12 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第11期
·1504 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年11月
合到猪ACE2基因内部，从而导致猪的ACE2基因被
3 讨 论
破坏，而嵌合 ACE2 基因在 P2A 短肽自我剪切作用
下，可以获得完整的嵌合ACE2蛋白。 CRISPR/Cas9基因编辑技术在猪遗传修饰研究
2.5 ACE2编辑的细胞克隆鉴定 中的应用，极大推动了抗病猪品种的培育 ［13-14］ 。如
经 G418 筛选后共获得 19 个单细胞克隆，测序 猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respi⁃
结果显示有 4 个单细胞克隆的 ACE2 基因成功被 ratory syndrome，PRRS）又称“蓝耳病”，是造成全世
ACE2 嵌合基因所替换（表 1，图 5A），敲入效率达 界养猪产业经济损失最严重的猪传染病之一，该病的
21%。对在线工具Cas⁃OFFinder寻找到的10个潜在 病原是猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproduc⁃
脱靶位点进行测序验证，测序结果显示所有潜在位 tivc and respiratory syndrome virus，PRRSV）。经研究
［15］
点并未发生脱靶效应（图5B）。 发现CD163蛋白是 PRRSV 感染宿主的必需受体 ，
sgRNA sf
AmpR promoter LA
GSG linker
P2A
AmpR
Cas9
sgRNA_sf
pUC57_ARM⁃2A
4 525 bp
chimeric CDS
ori
sgRNA sf
RA
pA
LA Linker P2A chimeric CDS RA
Cas9
sgRNA_sf
LA RA
ACE2 exon10
LA Linker P2A chimeric CDS RA
ACE2 exon10
Transcription
mRNA
Translation
截短的猪ACE2 完整的嵌合ACE2
LA为左微同源臂，RA为右微同源臂，chimeric CDS为嵌合ACE2基因序列，P2A为自剪切多肽2A。
图4 嵌合ACE2基因的敲入编辑策略
Figure 4 Schematic of chimeric ACE2 knock⁃in strategy
