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第42卷第2期                   马梦圆，程紫萍，孙鲁宁，等. 兰索拉唑致皮肤炎症的机制研究［J］.
                  2022年2月                     南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（02）：178-183                       ·179 ·


                    质子泵抑制剂（proton pump inhibitor，PPI）是一           12153S）（Cell Signaling Technology 公司，美国）；IL⁃
                类对各种原因所致的胃酸分泌增加都有良好效果                             1β抗体（货号：AF4006）（Affinity 公司，美国）；化学
                的抑酸药，已成为临床抗酸治疗的一线用药                    ［1-2］ 。随   发光液（Millipore公司，美国）；人永生化角质形成细
                着 PPI 临床广泛应用，其潜在的不良反应也逐渐显                         胞 HaCaT 细胞株（GDC0106）（武汉大学中国典型培
                 ［3］
                现 。长期使用PPI可诱发骨质疏松症、肝肾损害及                          养物保藏中心）；ICR 小鼠（SPF 级，合格证号：NO.
                潜在的心血管风险等         ［4-6］ 已被证实，且诱发皮肤不良              201905643，（南京市青龙山动物养殖场），雌雄各半，
                反应（cutaneous adverse drug reaction，cADR）的报道       18~22 g，于中国药科大学动物实验中心饲养，并获
                             ［7］
                也在逐渐增加 。PPI 引起的 cADR 大多是免疫性                       得 伦 理 委 员 会 批 准（动 物 伦 理 编 号 ：IACUC ⁃
                的，包括即时和迟发性超敏反应，多数情况下表现                            1910006）。
                为斑丘疹、红斑和瘙痒等，一般措施如停药和外科                                化学发光图像分析系统Tanon 5200 Multi（上海
                基础护理即可缓解。然而，如亚急性红斑狼疮、中                            天能科技有限公司）；电泳仪 PowerPac BASIC（Bio⁃
                                                                                                    TM
                毒性表皮裂解症等严重不良反应可危及患者生命                             Rad 公司，美国）；酶标仪（Bio Tek 公司，美国）；超声
                安全，这些cADR常伴随炎症反应。研究表明，核因                          破碎仪（Sonics公司，美国）；离心机（Eppendorf公司，
                子（nouclear factor，NF）⁃κB 可调控细胞因子等在皮               德国）。
                肤组织内的表达，参与皮肤炎症性相关疾病的发                             1.2  方法
                  ［8］
                生 。角质形成细胞（HaCaT）是皮肤组成的主要部                         1.2.1 小鼠分组与给药
                分，可抵御外源性损伤而保护机体。当皮肤受到刺                                小鼠购入后适应性饲养3 d，之后随机分为3组：
                激后，HaCaT会产生多种细胞因子，诱导炎症级联反                         ①对照组；②低剂量组：兰索拉唑250 mg/（kg·d）；③
                应。兰索拉唑（lansoprazole，LPZ）是目前临床常用的                  高剂量组：兰索拉唑 1 000 mg/（kg·d）。1 周灌胃给
                二代PPI，与一代的奥美拉唑相比，抑酸作用强烈且持                         药 7 次，每日灌胃给药时间不定，对照组予 0.5%
                                    ［9］
                久，耐受性好。Kepil等 的研究表明兰索拉唑是诱                         CMC⁃Na 溶液灌胃，低剂量组予12.50 mg/mL 的兰索
                发 cADR 的“罪魁祸首”。因此，本研究首先通过体                        拉唑混悬液，而高剂量组予 50.00 mg/mL 的兰索拉
                内实验，其次以 HaCaT 中 NF⁃κB 信号通路为基础，                    唑混悬液。每日称量记录小鼠体重，连续给药 6 个
                运用Western blot等技术，探究兰索拉唑诱发皮肤损                     月。对小鼠行脱颈椎处死后，在小鼠颈部涂抹脱毛
                伤的可能机制，为临床安全用药提供一定参考。                             膏，静置5 min，脱毛完全，剪下小片表皮放入多聚甲
                                                                  醛中进行固定，后期作石蜡包埋。将小鼠皮肤组织
                1  材料和方法
                                                                  的蜡块交由武汉赛维尔公司制作HE染色和IL⁃6的
                1.1  材料                                           免疫组化切片。
                    兰索拉唑原料药（纯度：99.45%，武汉远成共创                      1.2.2 细胞培养及分组
                科技有限公司）；羧甲基纤维素钠（黏度：600~3 000                          HaCaT用含1%双抗、10%胎牛血清的DMEM培
                Pa.s，上海麦克林生化科技有限公司）；兰索拉唑标                         养基培养于37℃、5% CO2的培养箱中，隔日换液。按
                准品（纯度：99.6%，批号：100709⁃201705，中国食品                 照1∶3传代，取对数期生长状态好的细胞开展实验。
                药品检定研究院）；青链霉素混合液（双抗）、GAPDH                            第一阶段实验用0.1% DMSO、10 、20 、40 μmol/L
                抗体（货号：GB11002）、HRP 标记山羊抗兔 IgG（货                   兰索拉唑孵育细胞24 h或48 h。第二阶段实验分为

                号：GB23303）等（武汉 Servicebio 公司）；Cell Count⁃         DMSO 组（0.1%）、PDTC 组（20 μmol/L）、PDTC+LPZ
                ing Kit⁃8（CCK⁃8试剂盒）、一抗稀释液、二抗稀释液、                  组、LPZ 组（40 μmol/L）共 4 组。各组间 DMSO 含量
                吡咯烷二硫代甲酸铵（pyrrolidine dithiocarbamate，            一致，共同培养24 h或48 h。
                PDTC）（货号：S1808）、PMSF、RIPA 裂解液等（上海                 1.2.3  CCK⁃8法检测不同浓度兰索拉唑作用于细胞
                碧云天）；胎牛血清（Biological Industries 公司，以色             24 h后细胞活力
                列）；DMEM 培养基、Trypsin⁃EDTA 消化液（Gibco 公                  设立空白培养基，培养基（含0.1% DMSO）孵育

                司，美国）；DMSO（Sigma公司，美国）；PVDF膜（Mer⁃                 HaCaT为对照组，另予10、20、40、80、160、200 μmol/L
                ck 公司，美国）；NF⁃κB p65（D14E12）抗体（货号：                 的兰索拉唑孵育细胞 24 h 后，CCK⁃8 试剂盒检测，
                8242S）、Phospho⁃NF⁃κB p65（Ser 536）抗体（货号：           37 ℃孵育 2.5 h 后测定吸光值，通过与各对照组分析
                3033S）、白 介 素（interleukin，IL）⁃ 6 抗 体（货 号 ：         比较，评价不同浓度兰索拉唑对细胞活力的影响。
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