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第42卷第3期 仲逢钰，秦振英，李 婧，等. MiR⁃484通过靶向MAPK8抑制人前体脂肪细胞的增殖与分化［J］.
2022年3月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（03）：325-332 ·329 ·

组相比，miR⁃484 inhibitor组在24 h及48 h的吸光值 生物信息学分析预测发现，MAPK8 可作为 miR⁃484
升高（P < 0.05，图 3A）。同时对细胞周期相关基因 的靶基因（图 4A）。为了进一步验证 miR⁃484 是否
Cyclin D1、Cyclin D3 和 CDK4 的 mRNA 相对表达量 可 与 MAPK8 的 3′ UTR 区 结 合 ，本 研 究 构 建 了
进行了检测，RT⁃qPCR实验发现miR⁃484 inhibitor组 MAPK8 的突变型（MAPK MUT）与野生型（MAPK
的增殖相关基因表达量均升高（P < 0.05，图3B），由 WT）质粒，并进行了双荧光素酶报告基因分析，结
此可见，沉默miR⁃484可以促进HPA的增殖。 果表明，与 mimic NC 组相比，miR ⁃ 484 mimic 与
为了研究沉默 miR⁃484 对 HPA 成脂分化的影 MAPK8 WT 共转组的相对荧光活性降低（图 4B，
响，在脂肪细胞中沉默 miR⁃484 后，对分化第 15 天 P < 0.05），表明miR⁃484可与野生型MAPK8结合，由
的成熟人脂肪细胞进行油红O染色，镜下观察发现， 此可见，MAPK8可以与miR⁃484结合，可作为miR⁃484
与对照组及inhibitor NC组相比，miR⁃484 inhibitor组 的靶基因。
脂肪细胞脂滴数量及体积增加（图3C），也对脂肪分 2.5 miR⁃484抑制MAPK8的mRNA及其蛋白表达
化相关基因PPAR γ、C/EBP α和FABP 4的mRNA相 为了进一步验证miR⁃48对其靶基因MAPK8的作

对表达量进行了检测，RT⁃qPCR 实验发现 miR⁃484 用，本研究在脂肪细胞中过表达miR⁃484，qRT⁃PCR
inhibitor 组的脂肪分化相关基因表达量均升高（P < 和蛋白免疫印迹检测结果显示，与对照组及 mimic
0.05，图 3D）。同时甘油三酯定量测定发现与对照 NC 组相比，过表达 miR⁃484 显著下调了脂肪细胞
组及inhibitor NC组相比，miR⁃484 inhibitor组的甘油 中 MAPK8 的 mRNA 和 蛋 白 水 平（ 图 5，P <

三酯含量增加（图 3E，P < 0.05）。这表明沉默 miR⁃ 0.05）。这表明miR⁃484可以抑制MAPK8的表达。
484可以促进HPA向成熟脂肪细胞分化。 2.6 过表达MAPK8部分挽救miR⁃484对HPA增殖
2.4 miR⁃484靶向作用于MAPK8 分化的抑制作用
miRNA 可以与 mRNA 的 3′UTR 区结合沉默靶 为了进一步研究 miR⁃484 是否确实通过其靶
基因的表达，从而发挥重要的生物学功能。通过在线 标 MAPK8 发挥功能，本研究将 miR⁃484 mimic 与

A B C
对照组 对照组
inhibitor NC组 inhibitor NC组
2.5 miR⁃484 inhibitor组 10 miR⁃484 inhibitor组
*# 8 *#
2.0
nm ） 6 *# 对照组
（ 450 1.5 *# mRNA的相对表达量 4 *#
1.0
D
0.5 2
0.0 0
0 h 24 h 48 h Cyclin D1 Cyclin D3 CDK4

D E
对照组 *# inhibitor NC组
inhibitor NC组
miR⁃484 inhibitor组 甘油三酯相对水平 3 2
5
mRNA的相对表达量 3 2 1 *# *# 1 0 对照组 inhibitor组
*#
4

miR⁃484 inhibitor组
0
PPAR γ C/EBP α FABP 4 inhibitor NC组 miR⁃484

将HPA细胞分为3组，miR⁃484 inhibitor组、inhibitor NC组分别转染miR⁃484 inhibitor及阴性对照空白质粒，对照组不转染。A：通过CCK⁃8
实验检测各组细胞的增殖能力；B：通过RT⁃qPCR实验检测增殖相关基因Cyclin D1、Cyclin D3和CDK4的mRNA相对表达量；C：人脂肪细胞油
红O染色图（×200）；D：通过RT⁃qPCR实验检测脂肪分化相关基因PPAR γ、C/EBP α和FABP 4的mRNA相对表达量；E：各组细胞甘油三酯含量
测定。与对照组相比，P＜0.05；与inhibitor NC组相比，P＜0.05（n=3）。
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图3 沉默miR⁃484促进HPA的增殖分化
Figure 3 miR⁃484 inhibitor promotes HPA proliferation and differentiation