Page 32 - 南京医科大学学报自然科学版
P. 32

第42卷第3期
               ·334 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年3月


              relationship between SIRT5 expression and SUVmax（Spearman correlation coefficient=0.648，P < 0.05）. Konck⁃out SIRT5 gene in
                                                          18
              CRC cells led to a significant decrease in GLUT1 expression，F⁃FDG uptake，and HIF1α transcriptional activity. Conclusion：SIRT5
                        18
              might inhibit F⁃FDG uptake via the HIF1α/GLUT1 pathway in CRC. SIRT5 might be a potential target for the treatment of CRC.
             ［Key words］ colorectal cancer；SIRT5；SUVmax；HIF1α
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2022，42（03）：333⁃339］




                  结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，全球每年                          情况、TNM 分期；患者术后随防至 2021 年 5 月，随
                                                    ［1］
              新增 140 万例，发病率居所有肿瘤第 3 位 。超过                       访时间 6~65 个月。本研究经医院伦理委员会批
              50%的结直肠癌患者在诊断时已错失手术机会，预                           准，所有患者知情并签署同意书。
              后欠佳，而伴有远处转移的晚期结直肠癌患者其5年                                DLD1、HT⁃29细胞（人结直肠癌细胞系，中国科学
              生存率低于 10% 。因此，寻找有效的分子靶点为                          院），用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基培养，添
                             ［2］
              结直肠癌患者早期诊疗提供依据，对提高患者的预                            加 100 mg/mL 青 霉 素 和 100 mg/mL 链 霉 素 ，置 于
              后至关重要。                                            37 ℃含5%CO2的细胞培养箱中。
                  基于肿瘤糖酵解旺盛的特点，氟⁃脱氧葡萄糖                          1.2  方法
                                             18
             （ F⁃fluorodeoxyglucose，F⁃FDG）正电子发射型计算              1.2.1  18 F⁃FDG PET/CT检查
               18
                                   18
              机断层扫描（positron emission tomography/computed            受检者检查前空腹至少6 h，检查前控制患者血
              tomography，PET/CT）广泛应用于许多恶性肿瘤诊                    糖正常。按照 0.05~0.10 mCi/kg 静脉注射 F⁃FDG
                                                                                                       18
                                         ［3］
              断、分期、疗效监测及预后分析 。摄取葡萄糖是糖                           （南京江原安迪科公司），静息60 min排空尿液后使
              酵解的第一个步骤，葡萄糖转运蛋白 1（glucose                        用联影 Umi780 PET/CT 扫描仪或 Siemens 超高清
              transporter 1，GLUT1）在多种肿瘤细胞中高表达，控                 Biograph mCT xPET/CT扫描仪进行扫描。扫描范围：
              制着葡萄糖的摄入 ，但 GLUT1 表达增高机制尚不                        颅顶至大腿根部。扫描参数：CT 扫描（120 kV，
                               ［4］
              完全清楚。沉默调节蛋白5（Sirtuin 5，SIRT5）是烟酰                  200 mA，螺距0.987 5 mm，旋转时间0.5 s，层厚3 mm，
                                                         ［5］
              胺腺嘌呤二核苷酸依赖的赖氨酸去酰化修饰酶 。                            间隔1.5 mm），PET采集（3 min/床位、采集4个床位、
              SIRT5可以通过其去乙酰化、去丙二酰化、去琥珀酰                         床位重叠26%）。CT数据进行衰减校正，采用自适应
              化、去戊二酰化等修饰影响多种葡萄糖代谢过程中                            滤波函数及2次迭代重建法，处理重建图像。在横轴
              的关键酶，进而促进肿瘤细胞糖酵解 。据报道，肺                           位融合图像上使用软件自动勾画感兴趣区三维体
                                               ［6］
              癌、乳腺癌、子宫内膜癌等多种恶性肿瘤中 SIRT5                         积，计算得出最大标准化摄取值（maximal standard
              mRNA 或蛋白表达明显升高，提示 SIRT5 在某些方                      uptake value，SUVmax）。由2位高年资核医学医师独
                                          ［5］
              面可能具有潜在的促肿瘤作用 。但SIRT5在结直                          立阅片，结果有分歧时经讨论得出统一结论。
              肠癌糖酵解中的作用及其潜在机制尚无定论。据                             1.2.2 免疫组化染色
                                                     18
              此，本研究拟分析结直肠癌患者 SIRT5 与 F⁃FDG                           10％福尔马林液固定的石蜡切片（厚度5 μm），
              PET/CT 显像、GLUT1 表达和患者预后的关系，并进                     常规脱蜡和水化后，PBS 冲洗 3 次，再用 0.01 mol/L
              一步探讨可能存在的机制。                                      枸橼酸盐抗原修复液（pH 值 6.0）进行抗原热修复
                                                                （微 波 法）。 SIRT5 抗 体（Abcam 公 司 ，英 国）及
              1  材料和方法
                                                                GLUT1 抗体（Abcam 公司，英国）孵育后，辣根过氧
              1.1  材料                                           化物酶标记二抗（上海 CST 公司）孵育，DBA 染色，
                  回顾性收集 2015 年 12 月—2020 年 12 月在南               苏木素染料复染，脱水，透明，封片。由 2 位有经验
              京市第一医院和江苏大学附属医院外科行手术治                             的病理学医师独立分析。按染色强度进行评分（评
              疗的结直肠癌患者共 78 例。所有患者均经术后病                          分标准：0=未染色，1=黄色，2=浅褐色，3=深棕色；分
              理明确诊断为原发性结直肠癌；结直肠癌组织及对                            值0~1分为低表达，2~3分为高表达）。
              应的正常癌旁组织齐全；术前未进行任何放、化疗                            1.2.3  CRISPR/Cas 9基因编辑敲除（knock⁃out，KO）
              及其他辅助治疗；患者均有完整的临床资料，包括                            SIRT5基因
              性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤分化程度、淋巴结转移                                设计 SIRT5⁃KO 引物。正向序列：5′⁃CACCG⁃
   27   28   29   30   31   32   33   34   35   36   37