Page 28 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第3期
·330 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年3月

A MAPK8 mimic 质 粒 共 转 染 进 HPA 细 胞 。 通 过
5′ ACUUCUACUAGCUAUGAGCCUGU 3′ MAPK8 WT
CCK⁃8实验检测转染后0 h、24 h及48 h HPA细胞的
3′ UAGCCCUCCCCUGACUCGGACU 5′ miR⁃484
增殖能力发现，与 miR⁃484 mimic 相比，共转染组
5′ ACUUCUACUAGCUAUACAAAGAU 3′ MAPK8 MUT
24 h 及 48 h 吸光度升高（P < 0.05，图 6A）。对细胞
B 1.5 MAPK8 MUT
周期相关基因Cyclin D1、Cyclin D3和CDK4的mRNA
MAPK8 WT
荧光素酶相对表达量 1.0 * 转部分逆转了miR⁃484引起的相关基因表达量的下
相对表达量进行检测，发现 MAPK8 与 miR⁃484 共
降（P < 0.05，图 6B）。由此可见，MAPK8 可以逆转
0.5
miR⁃484抑制HPA细胞增殖的作用。对分化第15天
的成熟人脂肪细胞进行油红O染色，镜下观察发现，
0
mimic NC组 miR⁃484 mimic组 MAPK8 逆转了过表达 miR⁃484 引起的脂肪细胞脂
A：通过TargetScan7.2预测MAPK8与miR⁃484之间的结合位点； 滴数量及体积的减少（图6C），对脂肪分化相关基因
B：将 MAPK WT、MAPK MUT、miR⁃484 mimic 和 mimic NC 质粒共转
PPAR γ、C/EBP α和FABP 4的mRNA 相对表达量进
染进入HPA细胞中，通过双荧光素酶报告基因实验检测各组的荧光
行检测，发现 MAPK8 可以逆转 miR⁃484 引起的脂
素酶活性。与mimic NC组相比，P＜0.05（n=3）。
*
图4 miR⁃484 靶向作用于MAPK8 肪分化相关基因表达量的下降（P < 0.05，图 6D）。
Figure 4 miR⁃484 targets MAPK8 甘油三酯定量测定，发现 MAPK8 逆转了过表达

A B C
1.5 miR⁃484 mimic组 1.5
MAPK8的mRNA 相对表达量 1.0 *# MAPK8 对照组 mimic NC组 —46 kDa MAPK8蛋白 相对表达量 1.0

0.5
0.5
0 β⁃ACTIN —43 kDa 0 *#
对照组 mimic NC组 对照组 mimic NC组
miR⁃484 mimic组
miR⁃484 mimic组

将HPA细胞分为3组，miR⁃484 mimic组、mimic NC组分别转染miR⁃484 mimic及阴性对照空白质粒（mimic NC），对照组不转染。A：qRT⁃
*
PCR检测MAPK8的mRNA表达；B：蛋白免疫印迹法检测MAPK8的蛋白表达；C：MAPK8的蛋白相对表达量。与对照组相比，P＜0.05；与mim⁃
ic NC组相比，P＜0.001（n=3）。
#
图5 miR⁃484抑制MAPK8的mRNA及其蛋白表达
Figure 5 The expression of MAPK8 was down⁃regulated by miR⁃484

miR⁃ 484 引起的甘油三酯含量下降（图 6E，P < 关，同时也可能是脂肪分化与形成过程的重要靶点。
0.05）。这表明过表达 MAPK8 可以逆转 miR⁃484 抑 抑制脂肪组织的脂肪生成是肥胖发生过程中
制HPA增殖分化的作用。 的一个中心事件，而脂肪细胞增殖和分化是脂肪组
织中脂质积累的基础，可由多种因素调节 ［18］ 。控制
3 讨 论
脂肪的分化及增殖可以抑制肥胖和肥胖相关疾病
miRNA是调节基因表达的非编码小RNA，在不 的发生。本研究表明miR⁃484与HPA细胞的增殖及
同组织或器官中都发挥重要作用，它在脂肪组织中 细胞周期调节基因 Cyclin D1、Cyclin D3 和 CDK4 表
的主要功能是调节脂肪细胞的增殖、分化、代谢和 达成负相关。细胞周期蛋白（Cyclin D1、Cyclin D3）
内分泌 ［16］ 。大量研究表明，肥胖与 miRNA 的失调 和细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK4）被认为是真核
密切相关，miRNA表达的改变可能导致控制一系列 生物中细胞生长和增殖的关键调节因子，这是哺乳
生物功能的基因表达模式的改变，包括炎症、胰岛 动物细胞中G1/S和G2/M转变所必需的。Liu等 ［19］
素敏感性和脂肪生成 ［17］ 。miR⁃484差异表达于肥胖 研究表明miR⁃484通过靶向CCL⁃18抑制胃癌细胞
人群，但是 miR⁃484 对脂肪细胞的生物学功能的影 的增殖。Xie等 发现lncRNA ZFAS1 通过沉默miR⁃
［20］
响尚不清楚。本研究发现miR⁃484在HPA分化过程 484来促进结肠癌细胞的增殖。这些研究与本研究
中表达逐渐降低，暗示了miR⁃484可能与肥胖发生相 结果相一致。同时，本研究也发现 miR⁃484 与脂肪