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南京医科大学学报（自然科学版） 第42卷第4期
·484 · Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） 2022年4月

·基础研究·

miR⁃192⁃5p 通过靶向 Notch3 减轻顺铂所致的肾小管上皮细胞

凋亡

吴汉章 ，陈 铖 ，谢彩蝶 ，吴 琳 ，毛慧娟 1*
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1，2
南京医科大学第一附属医院肾内科，江苏 南京 210029；盐城市第一人民医院肾内科，江苏 盐城 224000
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［摘 要］ 目的：探讨 Notch3 在顺铂诱导的人肾小管上皮细胞（HK⁃2）损伤中的表达变化及其潜在的相关上游微小 RNA
（microRNA，miRNA）调控机制。方法：体外培养HK⁃2细胞，Western blot及实时定量PCR检测Notch3在顺铂（20 μmol/L，24 h）
诱导HK⁃2细胞凋亡模型及正常细胞中的表达；Targetscan预测靶向Notch3的miRNA，实时定量PCR测定相关miRNA在顺铂诱导
HK⁃2细胞凋亡模型及正常细胞中的表达；然后，将HK⁃2细胞分别转染阴性对照模拟物（NC mimic）及miR⁃192⁃5p模拟物（miR⁃
192⁃5p mimic），并依据给予或不给予顺铂处理（20 μmol/L，24 h），分为NC mimic组、NC mimic+Cisplatin组、miR⁃192⁃5p mimic组、
miR⁃192⁃5p mimic+Cisplatin 组。Western blot 及实时定量 PCR 检测 Notch3 的表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡率，研究
miR⁃192⁃5p对顺铂所致肾小管上皮细胞凋亡及Notch3表达的影响；荧光素酶报告实验证实miR⁃192⁃5p与靶基因Notch3的靶
向关系。结果：Notch3 在顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡中的表达上调，同时 miR⁃192⁃5p 在顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡中
的表达下调；实时定量 PCR 证实转染 miR⁃192⁃5p 模拟物后，miR⁃192⁃5p 的表达量升高；过表达 miR⁃192⁃5p 能够减轻顺铂诱

导的肾小管上皮细胞凋亡，同时负向调控 Notch3 的表达；荧光素酶报告实验结果表明 miR⁃192⁃5p 直接靶向作用于 Notch3
的 3′⁃UTR，抑制Notch3的表达，证实Notch3是miR⁃192⁃5p的直接靶标。结论：miR⁃192⁃5p可通过直接抑制Notch3的表达而减
轻顺铂所致的肾小管上皮细胞凋亡。
［关键词］ 急性肾损伤；微小RNA；细胞凋亡；信号转导

［中图分类号］ R692.6 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2022）04⁃484⁃07
doi：10.7655/NYDXBNS20220404

miR⁃192⁃5p attenuates cisplatin⁃induced apoptosis of tubular epithelial cells by inhibiting
expression of Notch3

1，2
1
1
1
WU Hanzhang ，CHEN Cheng ，XIE Caidie ，WU Lin ，MAO Huijuan 1*
2
1 Department of Nephrology，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing 210029；Department
of Nephrology，the First People’s Hospital of Yancheng，Yancheng 224000，China
［Abstract］ Objective：To investigate the expression changes of Notch3 in cisplatin⁃induced renal tubular epithelial cells（HK⁃2）
injury and the potential regulation mechanism related to upstream microRNA. Methods：Based on HK⁃2 cells apoptosis model induced
by cisplatin（20 μmol/L，24 h），Western blot and RT⁃qPCR were used to analyze the expression of Notch3 in HK⁃2 cells. Targetscan
was used to search potential miRNAs that bind the 3’⁃UTR of Notch3. RT⁃qPCR was used to detect the expression of miR⁃192⁃5p in
HK⁃2 cells after cisplatin treatment. Then，HK⁃2 cells transfected with negative control mimic（NC mimic）and miR⁃192⁃5p mimic
respectively，and treated with or without cisplatin（20 μmol/L，24 h），were divided into four groups：NC mimic group（NC）；NC mimic+
cisplatin group（NC+Cis）；miR⁃192⁃5p mimic group（OE）；miR⁃192⁃5p mimic+cisplatin group（OE+Cis）. Western blot and RT⁃qPCR
were used to demonstrate the effect of miR⁃192⁃5p on the expression of Notch3 after cisplatin treatment，while Western blot and flow
cytometry were used to demonstrate the effect of miR⁃192⁃5p on apoptosis of HK⁃2 cells. Dual luciferase reporter assay was used to
verified whether miR⁃192⁃5p targets Notch3. Results：Notch3 was up⁃regulated while miR⁃192⁃5p was down⁃regulated in HK⁃2 cells
after cisplatin treatment compared with that in the normal controls. RT⁃qPCR showed that the expression of miR⁃192⁃5p in HK⁃2 cells

［基金项目］ 国家自然科学基金（81970639）；江苏省卫生和健康委员会科研项目（H2017023）
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通信作者（Corresponding author），E⁃mail：huijuanmao@126.com