Page 39 - 南京医科大学学报自然科学版
P. 39

第42卷第4期         吴汉章，陈 铖，谢彩蝶，等. miR⁃192⁃5p通过靶向Notch3减轻顺铂所致的肾小管上皮细胞
                  2022年4月                  凋亡［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（4）：484-490                    ·489 ·


                 A                                                           B
                                                                                1.5                  □ NC
                                                                                                     ■ mimic
                               Luciferase      Notch3⁃3’’UTR   Poly A           1.0    **
                                                                              相对荧光素酶活性


                           Notch3 WT  5’. . .GCAGCGUGACCGAGAUAGGUCAU. . .3’     0.5
                           hsa⁃miR⁃192⁃5p  3’. . .CCGACAGUUAAGU AUCCAGUC. . .3’
                                                                                 0
                           Notch3 Mut  5’. . . GCAGCGUGACCGAGAAUCCAGUU. . .3’        Notch3 WT    Notch3 Mut

                   A：Notch3 野生型（WT）和突变型（Mut）与 miR⁃192⁃5p 的结合位点图示；B：Notch3 靶基因验证（双荧光素报告酶基因检测）；NC：转染 NC
                mimic组；mimic：转染miR⁃192⁃5p mimic组；两组比较，P < 0.01（n=3）。
                                                    **
                                            图5 miR⁃192⁃5p与靶基因Notch3的靶向关系验证
                                 Figure 5 Verification of the direct interaction between miR⁃192⁃5p and Notch3


                胞活化的 caspase3（cleaved⁃caspase3）表达及细胞凋             要的作用。miRNA 水平异常可能是肾损伤发生和
                亡率降低，提示miR⁃192⁃5p可对顺铂所致的肾小管                       发展过程中蛋白质表达异常的原因之一 。多种
                                                                                                        ［9］
                细胞凋亡起保护作用。                                        miRNA 及其相应靶基因在肾损伤或修复中发挥的
                    Notch 受体是高度保守的Ⅰ型跨膜糖蛋白，包                       作用已被研究所证实，这些发现表明miRNA 是AKI
                括 Notch1、Notch2、Notch3 和 Notch4，它们由细胞外            的关键调节因子及潜在的治疗靶点                ［8，11］ 。
                结 构 域（NECD）和 细 胞 内 结 构 域（NICD）组 成 。                   本研究先期预测了可能与 Notch3 的 3′⁃UTR 结
                Notch 受体的激活是由 NECD 与典型的 Notch 配体                  合的 miRNA，并与已报道的 AKI 中下调的 miRNA
                相互作用引起的，这些配体也是跨膜蛋白，包括                             取交集，从而得出 11 个潜在 miRNA。进一步发现
                Jagged1、Jagged2、dll1、dll3 和 dll4。与 Notch 配体的      miR⁃192⁃5p在肾损伤活检样本中表达大幅下调（约
                结合导致 Notch 的切割和 NICD 的释放，然后 NICD                  6 倍），此外也有研究报道在 I/R 和顺铂诱导的大鼠
                转移到细胞核，与 CSL 转录因子相互作用，并启动                         肾损伤模型尿液中 miR⁃192⁃5p 表达大幅增高               ［17-18］ 。
                Notch靶基因的转录从而发挥生物学效应 。                            近来Zou等    ［19］ 也报道药物上调miR⁃192⁃5p的表达能
                                                    ［14］
                    关于 Notch 信号在肾脏病理中的研究多集中                       够减轻顺铂诱导的小鼠肾损伤，但其具体机制尚未
                于肾小球疾病及肾纤维化，已有研究大多集中于                             阐明。这些研究都提示 miR⁃192⁃5p 或在 AKI 过程
                Notch1。Notch3 是最近才研究增多的一种肾脏疾                      中起着重要作用。本研究发现，顺铂处理的人近端
                病介质。正常情况下，Notch3 主要在血管平滑肌                         肾小管上皮细胞miR⁃192⁃5p表达降低，而其靶基因
                细胞中表达。单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral                 Notch3 表达升高。进一步发现过表达 miR⁃192⁃5p
                obstruction，UUO）和肾毒性血清肾病动物模型中表                    后 ，其 靶 基 因 Notch3 的 表 达 被 显 著 下 调 ，同 时
                明 Notch3 由受累肾实质细胞重新表达，并发挥了                        cleaved⁃caspase3 表达及细胞凋亡率降低，这提示
                促进肾脏疾病进展的有害作用              ［15-16］ 。最近Kavvadas    miR⁃192⁃5p可通过抑制其靶基因Notch3的表达，进
                  ［6］
                等 发现在小鼠缺血再灌注肾损伤（ischemia⁃reper⁃                   而抑制线粒体凋亡途径，导致细胞凋亡相关蛋白
                fusion injury，I/R）模型中，肾小管过表达 Notch3，肾             cleaved⁃caspase3 表达降低，减轻肾小管上皮细胞凋
                小管上皮细胞 Notch3 特异性敲除小鼠中则显示较                        亡，但这其中的具体机制仍需进一步在动物实验中
                轻的肾损伤及保留的肾功能，肾小管损伤及炎症浸                            论证。

                润均有所改善。而 Notch3 信号激活的小鼠则在 I/R                         Notch3 是 AKI 损伤的一种重要介质，本研究证
                和UUO后对肾脏损伤有较高的易感性，炎症反应及                           实 miR⁃192⁃5p 可通过下调 Notch3 表达来减轻顺铂
                肾小管损伤加重 。本研究通过体外培养人肾小管                            诱导的肾小管上皮细胞凋亡，这或能为急性肾损伤
                              ［6］
                上皮细胞证实，在顺铂毒性作用下，HK⁃2 细胞中                          的防治提供一种新的研究思路和治疗策略。
                Notch3异常高表达，而抑制Notch3高表达则能够减
                轻肾小管上皮细胞凋亡。                                      ［参考文献］
                    越来越多的证据表明，miRNA 在 AKI 中起着重                   ［1］ BELLOMO R，KELLUM J A，RONCO C. Acute kidney in⁃
   34   35   36   37   38   39   40   41   42   43   44