Page 37 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第4期 吴汉章,陈 铖,谢彩蝶,等. miR⁃192⁃5p通过靶向Notch3减轻顺铂所致的肾小管上皮细胞
2022年4月 凋亡[J]. 南京医科大学学报(自然科学版),2022,42(4):484-490 ·487 ·
A 空白对照组 顺铂组
Q1 Q2 4 Q1 Q2
4
10 1.72% 1.76% 10 0.667% 2.58% 15
**
10 3 10 3 ( % )
FL3⁃H∷PI 10 2 FL3⁃H∷PI 10 2 细胞凋亡率 10
10 1 10 1 5
Q4 Q3 Q4 Q3
10 0 94.7% 1.86% 10 0 89.7% 7.03% 0
3
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 10 4 空白对照组 顺铂组
FL1⁃H∷Annexin V⁃FITC FL1⁃H∷Annexin V⁃FITC
空白对照组 顺铂组
Notch3蛋白相对相对表达量 2 Cleaved⁃caspase3蛋白相对表达量 1.0
B
Notch3 280 kDa 4 3 *** 2.0 *
1.5
36 kDa
GAPDH
17 kDa 1 0.5
Cleaved⁃caspase3
GAPDH 36 kDa 0 空白对照组 顺铂组 0 空白对照组 顺铂组
mRNA相对表达量 2
C 3 ***
Notch3 1
0
空白对照组 顺铂组
A:各组细胞凋亡率比较(流式细胞术);B:各组Notch3、cleaved⁃caspase3蛋白表达水平比较(Western 印迹);C:各组Notch3 mRNA表达水
平(实时定量 PCR);顺铂处理组(20 μmol/L,24 h);与空白对照组比较,P < 0.05,P < 0.01, P < 0.001(n=3)。
*
**
***
图1 顺铂处理后HK⁃2细胞Notch3及cleaved⁃caspase 3表达情况
Figure 1 The expression of Notch3 and cleaved⁃caspase3 in HK⁃2 cells after cisplatin treatment
A Human NOTCH3 ENST00000263388,,2 3’’UTR length::1646 ENST00000263388.2
45
0.1k 0.2k 0.3k 0.4k 0.5k 0.6k 0.7k 0.8k 0.9k 1k 1.1k 1.2k 1.3k 1.4k 1.5k
Conscrvcd sitcs for miRNA familics broadly conscrved among vcrtchratcs
miR⁃7⁃5p miR⁃150⁃5p
miR⁃1⁃3p/206
Poorly conserved sites of miRNA families broadly conserved among vertebrates miR⁃141⁃3p/200a⁃3p miR⁃24⁃3p miR⁃219⁃5p miR⁃1
miR⁃192⁃5p/215⁃5p miR⁃27⁃3p miR⁃34⁃5p/449⁃5p miR⁃129⁃3p miR⁃125⁃5p miR⁃1⁃3p/2p
miR⁃214⁃5p
miR⁃31⁃5p
Conserved sites for miRNA families conserved among mammals
miR⁃340⁃5p miR⁃381⁃3p
miR⁃136⁃5p
B C 1.5
total elements 1.0
预测 下调 11 miR⁃ 26a⁃1⁃3p、miR⁃ 151a⁃3p、 miR⁃192⁃5p相对表达量
miR⁃4510、miR⁃194⁃5p、miR⁃206、 **
525 11 65 0.5
miR⁃ 4482⁃3p、miR⁃ 26a⁃ 2⁃3p、
miR⁃660⁃5p、miR⁃582⁃3p、miR⁃
192⁃5p、miR⁃194⁃3p 0
空白对照组 顺铂组
A:Notch3预测图示(Targetscan平台);B:潜在靶向Notch3的miRNA的筛选;C:顺铂(20 μmol/L,24 h)处理肾小管上皮细胞后miR⁃192⁃5p
的表达检测(实时定量PCR)。与空白对照组比较,P < 0.01(n=3)。
**
图2 靶向Notch3的潜在miRNA的预测和检测
Figure 2 Gene prediction and verification of possible miRNAs targeting to Notch3