Page 38 - 南京医科大学学报自然科学版
P. 38

第42卷第4期
               ·488 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年4月


                A            5 000        ***               B             3         ***
                           miR⁃192⁃5p相对表达量  3 000                        mRNA相对表达量  2 1          ##
                             4 000



                             2 000
                                                                         Notch3
                             1 000
                                                                          0
                                                                               NC  NC+Cis  OE  OE+Cis
                                0
                                  对照组    转染组
                C                                           D              NC                     NC+Cis
                                                                    Q1            Q2       4  Q1           Q2
                                                                  4
                                                                 10  3.33%        2.58%  10  0.221%        7.32%
                                                                 10 3                    10 3
                               NC NC+Cis OE OE+Cis
                                                                FL3⁃H∷Pl                FL3⁃H∷Pl
                          Notch3                280 kDa          10 2                    10 2
                         GAPDH                  036 kDa
                                                                 10 1                    10 1
                   Cleaved⁃caspase3             017 kDa
                                                                    Q4            Q3        Q4             Q3
                                                                 10 0  93.4%      0.668%  10 0  83.9%      8.60%
                         GAPDH                  036 kDa              0   1   2   3   4        0  1   2    3  4
                                                                    10  10  10  10 10       10  10  10  10  10
                                                                    FL1⁃H∷AnnexinV⁃FITC      FL1⁃H∷AnnexinV⁃FITC
                                                                            OE                    OE+Cis
                           3         ***                         10 4  Q1          Q2    10 4  Q1          Q2
                         Notch3蛋白相对表达量  2 1       ###           FL3⁃H∷Pl  10 3 2        FL3⁃H∷Pl  10 3 2
                                                                                                           3.43%
                                                                                   2.21%
                                                                                            0.285%
                                                                    1.08%
                                                                                         10
                                                                 10

                           0                                     10 1 0  Q4       Q3     10 1 0  Q4        Q3
                                                                    96.1%
                                                                                                           5.68%
                                                                                  0.518%
                                                                                            90.6%
                                                                                         10
                                                                 10
                               NC  NC+Cis  OE   OE+Cis              10 0  10 1  10 2  10 10 4  10 0  10 1  10 2  10 3  10 4
                                                                                  3
                                                                     FL1⁃H∷AnnexinV⁃FITC     FL1⁃H∷AnnexinV⁃FITC
                         Cleaved⁃caspase3蛋白相对表达量  1.5  **  ##            ( % ) 细胞凋亡率  15 5  ***    #
                                                                          20
                          2.0
                                                                          10
                          1.0
                          0.5
                                                                          0
                           0
                                    NC+Cis
                               NC
                                                                                           OE
                                                                                   NC+Cis
                                                                              NC
                                                                                                 OE+Cis
                                            OE
                                                OE+Cis
                                                                                                       ***
                 A:miR⁃192⁃5p mimic 的转染效率检测;NC mimic 组为对照组;miR⁃192⁃5p mimic 组(20 nmol/L)为转染组;与对照组比较, P < 0.001
             (n=3);B:各组Notch3 mRNA表达水平(实时定量 PCR);C:各组Notch3、cleaved⁃caspase3蛋白表达水平比较(Western 印迹);D:各组细胞凋亡
              率比较(流式细胞术);NC:转染 NC mimic 的对照组;NC+Cis:转染 NC mimic 的顺铂处理组(20 μmol/L,24 h);OE:转染 miR⁃192⁃5p mimic 组;
              OE+Cis:转染miR⁃192⁃5p mimic的顺铂处理组;与NC组比较,P < 0.01, P < 0.001;与NC+Cis组比较,P < 0.05,P < 0.01, P < 0.001(n=3)。
                                                                                   #
                                                                                                 ###
                                                                                          ##
                                                               ***
                                                       **
                                       图4  miR⁃192⁃5p对顺铂所致细胞凋亡和Notch3表达的影响
                           Figure 4  Effect of miR⁃192⁃5p on cisplatin⁃induced apoptosis and the expression of Notch3
              实了 miR⁃192⁃5p 与 Notch3 之间的直接作用关系                  通路是顺铂诱导的 AKI 和细胞损伤的关键机制                    [12] 。
             (图 5)。                                             作为凋亡的执行酶之一,caspase3 可通过蛋白水解
                                                                作用分解细胞内的组成蛋白成分,导致细胞最终形
              3 讨 论
                                                                成凋亡小体。既往已有研究证实在肾损伤动物模
                  凋亡以细胞自杀或程序性死亡的方式参与顺铂                          型中,活化的 caspase3 表达明显增加           [13] 。本研究显
                            [4]
              所致AKI的发展 。据报道,线粒体介导的凋亡信号                          示过表达miR⁃192⁃5p后,顺铂诱导的肾小管上皮细
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