Page 38 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第4期
·488 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年4月

A 5 000 *** B 3 ***
miR⁃192⁃5p相对表达量 3 000 mRNA相对表达量 2 1 ##
4 000

2 000
Notch3
1 000
0
NC NC+Cis OE OE+Cis
0
对照组 转染组
C D NC NC+Cis
Q1 Q2 4 Q1 Q2
4
10 3.33% 2.58% 10 0.221% 7.32%
10 3 10 3
NC NC+Cis OE OE+Cis
FL3⁃H∷Pl FL3⁃H∷Pl
Notch3 280 kDa 10 2 10 2
GAPDH 036 kDa
10 1 10 1
Cleaved⁃caspase3 017 kDa
Q4 Q3 Q4 Q3
10 0 93.4% 0.668% 10 0 83.9% 8.60%
GAPDH 036 kDa 0 1 2 3 4 0 1 2 3 4
10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
FL1⁃H∷AnnexinV⁃FITC FL1⁃H∷AnnexinV⁃FITC
OE OE+Cis
3 *** 10 4 Q1 Q2 10 4 Q1 Q2
Notch3蛋白相对表达量 2 1 ### FL3⁃H∷Pl 10 3 2 FL3⁃H∷Pl 10 3 2
3.43%
2.21%
0.285%
1.08%
10
10

0 10 1 0 Q4 Q3 10 1 0 Q4 Q3
96.1%
5.68%
0.518%
90.6%
10
10
NC NC+Cis OE OE+Cis 10 0 10 1 10 2 10 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
3
FL1⁃H∷AnnexinV⁃FITC FL1⁃H∷AnnexinV⁃FITC
Cleaved⁃caspase3蛋白相对表达量 1.5 ** ## （ % ） 细胞凋亡率 15 5 *** #
20
2.0
10
1.0
0.5
0
0
NC+Cis
NC
OE
NC+Cis
NC
OE+Cis
OE
OE+Cis
***
A：miR⁃192⁃5p mimic 的转染效率检测；NC mimic 组为对照组；miR⁃192⁃5p mimic 组（20 nmol/L）为转染组；与对照组比较， P < 0.001
（n=3）；B：各组Notch3 mRNA表达水平（实时定量 PCR）；C：各组Notch3、cleaved⁃caspase3蛋白表达水平比较（Western 印迹）；D：各组细胞凋亡
率比较（流式细胞术）；NC：转染 NC mimic 的对照组；NC+Cis：转染 NC mimic 的顺铂处理组（20 μmol/L，24 h）；OE：转染 miR⁃192⁃5p mimic 组；
OE+Cis：转染miR⁃192⁃5p mimic的顺铂处理组；与NC组比较，P < 0.01， P < 0.001；与NC+Cis组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001（n=3）。
#
###
##
***
**
图4 miR⁃192⁃5p对顺铂所致细胞凋亡和Notch3表达的影响
Figure 4 Effect of miR⁃192⁃5p on cisplatin⁃induced apoptosis and the expression of Notch3
实了 miR⁃192⁃5p 与 Notch3 之间的直接作用关系 通路是顺铂诱导的 AKI 和细胞损伤的关键机制 ［12］ 。
（图 5）。 作为凋亡的执行酶之一，caspase3 可通过蛋白水解
作用分解细胞内的组成蛋白成分，导致细胞最终形
3 讨 论
成凋亡小体。既往已有研究证实在肾损伤动物模
凋亡以细胞自杀或程序性死亡的方式参与顺铂 型中，活化的 caspase3 表达明显增加 ［13］ 。本研究显
［4］
所致AKI的发展 。据报道，线粒体介导的凋亡信号 示过表达miR⁃192⁃5p后，顺铂诱导的肾小管上皮细