Page 66 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第6期
·818 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年6月

A TPO组 TPO+Rap组 B 100
10 3 10 3 *
Q1 Q2 10 2 Q1 Q2 （ % ） 80
2
FITC⁃CD41 10 1 10 1 CLEC⁃2表达率 60
10
40
0 0 20
10 Q3 Q4 10 Q3 Q4
0
TPO组 TPO+Rap组
10 0 10 1 10 2 10 3 10 0 10 1 10 2 10 3
PE⁃CLEC⁃2
A：流式细胞仪检测巨核细胞表面CLEC⁃2的表达；B：两组CLEC⁃2表达的定量比较。两组比较，P < 0.05（n=3）。
*
图2 雷帕霉素对小鼠胎肝巨核细胞CLEC⁃2表达的影响
Figure 2 Effects of rapamycin on the expression of CLEC⁃2 in mice fetal liver megakaryocytes

25 WT组 有丝分裂，为了探究 CLEC⁃2 的缺陷是否影响自噬
Plt Clec⁃2 组
-/-
紊乱导致胎肝来源的巨核细胞的核内有丝分裂，在
20
（ % ） * 分离胎肝细胞的第1天就加入Rap与细胞因子TPO
共同孵育培养5 d，诱导出巨核细胞并通过流式细胞
CD61 + 15 仪进行巨核细胞分析检测（图5）。流式细胞仪的核
CD41 + 10 型分析能体现巨核细胞核内有丝分裂的程度，先用
CD41 选出巨核细胞，然后用碘化丙啶标记细胞核。
5
发现与对照组相比，CLEC⁃2的缺陷能显著降低自噬
0
DMSO组 Rap组 紊乱导致的高倍体巨核细胞（≥8 N）的个数（P <
200 nmol/L RAP 处理小鼠胎肝细胞 5 d（不改变细胞培养基）， 0.05）。
CD41、CD61双阳性率统计表。两组比较，P < 0.01（n=3）。
*
2.6 CLEC⁃2 的缺陷降低 Rap 诱导胎肝来源的巨核
图3 流式细胞术分析CD41和CD61的表达 细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CyclinD2的表达
Figure 3 CD41 and CD61 expression analyzed by flow cy⁃ 进一步探讨 CLEC⁃2 影响自噬的可能机制，检
tometry
测跟细胞增殖相关的细胞周期蛋白以及周期监测

DAPI CD41 LC3 Merge

WT组

Plt Clec⁃2 -/- 组

将OCT包埋的骨髓切成10 μm切片，并用抗LC3和抗CD41抗体染色（n=3，比例尺=10 μm）。
图4 小鼠骨髓的免疫荧光染色
Figure 4 Immunofluorescence staining of mouse bone marrow