Page 67 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第6期 姜 江，丁育红，贾 慧，等. 血小板受体C型凝集素样受体2在巨核细胞自噬中的作用［J］.
2022年6月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（06）：815-820 ·819 ·

A 点。检测不同处理组胎肝诱导纯化的巨核细胞的
80 WT组
Plt Clec⁃2 组 Cyclin D1、Cyclin D2 蛋白，发现 Rap 处理胎肝巨核
-/-
（ % ） * 细胞后，CLEC⁃2 敲除小鼠巨核细胞 CyclinD1、Cy⁃
低倍体巨核细胞比率 60 意义（P < 0.05，图6）。
clinD2 的表达量比 WT 型小鼠低，且差异有统计学
40
讨 论
3
20
研究表明，CLEC⁃2可以通过Syk信号通路激活

0 Plcγ2，级联放大 PKC 信号通路，进而活化血小板。
DMSO Rap
而且，Syk 信号通路已被证实参与调节巨核细胞的
B 80
WT组 自噬过程。但其具体作用机制仍不明确。因此，本
Plt Clec⁃2 组
-/-
（ % ） * 研究的创新之处在于应用CLEC⁃2缺陷小鼠来检测
高倍体巨核细胞比率 60 噬能造成巨核细胞CLEC⁃2表达的改变，证明CLEC⁃2
CLEC⁃2在自噬过程中是否发挥重要作用。
研究表明在造血干细胞阶段进行药物干预自
40
参与巨核细胞的自噬过程。基因敲除小鼠模型是
20
目前最为可靠的研究工具。本研究建立了 CLEC⁃2
缺陷的小鼠模型。将该基因敲除之后，巨核细胞缺
0
失 CLEC⁃2 蛋白，但并不影响小鼠的生存与发育。
DMSO Rap
A：低倍体（2N~4N）巨核细胞百分比；B：高倍体（≥8N）巨核细胞
用 mTOR 的抑制剂 Rap 处理造血干细胞诱导自噬
百分比。两组比较，P < 0.05（n=3）。 后，胎肝细胞诱导出的 CLEC⁃2 敲除巨核细胞虽然
*
图 5 200 nmol/L Rap 和 DMSO 诱导小鼠胎肝细胞巨核细
胞的核型分析 自噬增强，但是巨核细胞的CD41表达以及CD41和
Figure 5 Karyotype analysis of megakaryocytes induced CD61的共表达均被抑制。这表明CLEC⁃2可能调节
by 200 nmol/L RAP and DMSO in mice fetal liver 自噬过程，即 CLEC⁃2 的缺陷显著抑制自噬过程中
cells 巨核细胞CD41的水平。

A B
DMSO Rap 2.0 WT组
-/-
-/- 组 -/- 组 Plt Clec⁃2 组
WT组 Plt Clec⁃2 WT组 Plt Clec⁃2 1.5
Cyclin D1 CyclinD1/β⁃actin 蛋白相对表达量 1.0
—36 kDa *
—42 kDa 0.5
β⁃actin
0
DMSO Rap
C DMSO Rap D 2.0 WT组
-/-
组 组 Plt Clec⁃2 组
-/- -/-
WT组 Plt Clec⁃2 WT组 Plt Clec⁃2 1.5
Cyclin D2 —31 kDa CyclinD2/β⁃actin 蛋白相对表达量 1.0 *
—42 kDa 0.5
β⁃actin
0
DMSO Rap
A、B：Western blot 检测Rap对胎肝来源巨核细胞中CyclinD1蛋白表达的影响（A）和半定量分析结果（B）；C、D：Western blot 检测Rap对胎
肝来源巨核细胞中CyclinD2蛋白表达的影响（C）和半定量分析结果（D）。 两组比较，P < 0.05（n=3）。
*
图6 Rap对小鼠胎肝来源巨核细胞中Cyclin D1和Cyclin D2表达的影响
Figure 6 Effects of rapamycin on the expression of Cyclin D1 and Cyclin D2 in mice fetal liver derived megakaryocytes