Page 31 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第8期 南京医科大学学报（自然科学版）
2022年8月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·1073 ·

·基础研究·

维生素D受体核定位信号的鉴定

马泽萌，陈允梓 *
南京医科大学基础医学院免疫学系，江苏 南京 211166

［摘 要］ 目的：确定维生素D受体（vitamin D receptor，VDR）的核定位信号并验证其功能。方法：通过软件分析及文献调研
预测VDR核定位信号，利用点突变试剂盒构建了VDR一系列点突变体，通过蛋白质免疫印迹检测VDR在胞质和胞核里的分
布，并结合免疫荧光观察确定其预测突变点对VDR入核的影响，最后采用实时荧光定量链式聚合酶反应（quantitative real⁃time
PCR，qPCR）检 测 VDR 下 游 基 因 的 表 达 ，以 判 断 VDR 核 定 位 突 变 体 的 活 性 。 结 果 ：确 定 VDR 核 定 位 信 号 序 列 为
RRSMKRKALFLT ，构建的VDR一系列核定位序列（nuclear localization sequence，NLS）点突变体在细胞内的表达主要分布在
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胞质里，维生素D（vitamin D，VD）既不能诱导这些点突变体入核，也不能促进VD下游基因表达。结论：VDR核定位确定信号
能有效控制VDR进入细胞核发挥转录因子作用，进而影响其下游基因的表达，为探索VD及VDR相关疾病的治疗提供新平台
和思路。
［关键词］ 维生素D受体；维生素D；核定位信号；转录调控
［中图分类号］ R392.11 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2022）08⁃1073⁃07
doi：10.7655/NYDXBNS20220804

Identification of nuclear localization signal of vitamin D receptor（VDR）

MA Zemeng，CHEN Yunzi *
Department of Immunology，School of Basic Medicine，Nanjing Medical University，Nanjing 211166，China

［Abstract］ Objective： To determine the nuclear localization signal of vitamin D receptor（VDR）and verify its function. Methods：
The nuclear localization signal of VDR was predicted by software analysis and literature investigation. A series of point mutants of VDR
were constructed by a point mutation kit. The distribution of VDR in the cytoplasm and nucleus was obsened by Western blot and
immunofluoresceme to determine the effect of mutation points in the entry of VDR into the nucleus. Finally，quantitatve real⁃time PCR
（qPCR）was used to detect the expression of genes downstream of VDR to determine the activity of VDR nuclear localization mutants.
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Results：The nuclear localization signal sequence of VDR was determined to be RRSMKRKALFLT . The expression of a series of NLS
（nuclear localization sequence）point mutants of VDR was mainly distributed in the cytoplasm. Vitamin D could neither induce these
point mutants into the nucleus nor promote the expression of downstream genes of vitamin D. Conclusion：VDR nuclear localization
signal can effectively control the entry of VDR into the nucleus，play the role of transcription factors，and then affect the expression of
downstream genes，which provides a new platform and idea for exploring the treatment of vitamin D and VDR related diseases。
［Key words］ vitamin D receptor；vitamin D；nuclear localization signal；transcription regulation
［J Nanjing Med Univ，2022，42（08）：1073⁃1079］

维生素 D（vitamin D，VD）是一种脂溶性维生 神经系统和代谢系统中也发挥重要的调节作用，它
［2］
［1］
素 ，不仅调节钙磷代谢和骨健康，在免疫系统 、 通过与维生素D受体（vitamin D receptor，VDR）结合
而发挥作用 ［3-4］ 。VD 与 VDR 的结合能激活 VDR 发
生核转位，在细胞核内发挥转录因子功能，启动下
［基金项目］ 国家自然科学基金（81873110）
游基因的表达，从而参与细胞的生长分化与免疫应
∗
通信作者（Corresponding author），E⁃mail：chenyunzi@njmu.edu.
cn 答的调控 ［5-7］ 。