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第42卷第8期         庄一波，杨     勇，宁晶晶，等. STAT3通过血小板反应蛋白4诱导足细胞凋亡及炎症反应［J］.
                  2022年8月                  南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（08）：1087-1092，1106                   ·1091 ·


                A   200                 B   40                  C    50    *            D    30    *
                   （ % of control）  150  *  *  （ nmol/mg）  30  *  *  （ U/mg）  40   *        CAT（ U/mg）  20  *

                                                                     30
                    100
                                            20
                                                                     20
                   ROS  50                  MDA  10                 SOD  10                  10
                     0                       0                       0                       0
                               HG+si⁃TSP⁃4
                       Control  HG HG+si⁃NC    Control  HG HG+si⁃NC    Control  HG HG+si⁃NC    Control  HG HG+si⁃NC
                                                        HG+si⁃TSP⁃4
                                                                                                        HG+si⁃TSP⁃4
                                                                                HG+si⁃TSP⁃4
                   足细胞用空白对照、HG诱导、HG诱导+ si⁃NC 转染或HG诱导+si⁃TSP⁃4转染处理。A：使用DCF⁃DA 方法检测ROS水平；B~D：MDA（B）、
                SOD（C）和CAT（D）的相对水平使用试剂盒检测。两组比较，P＜0.05（n=3）。
                                                         *
                                             图3 干扰TSP⁃4减轻HG诱导的足细胞氧化应激
                                Figure 3 Knockdown of TSP⁃4 alleviates oxidative stress in HG⁃induced podocytes


                         A   250     *      *       B   800    *               C  100     *
                            （ pg/mg）  200              （ pg/mg）  600   *         （ pg/mg）  80     *
                                                                                   60
                             150
                                                        400
                            IL⁃1β  100                 TNF⁃α  200                IL⁃6  40
                              50
                                                                                   20
                               0                         0                          0
                                Control  HG HG+si⁃NC       Control  HG HG+si⁃NC      Control  HG HG+si⁃NC
                                                                                              HG+si⁃TSP⁃4
                                                                    HG+si⁃TSP⁃4
                                         HG+si⁃TSP⁃4
                   足细胞用空白对照、HG诱导、HG诱导+si⁃NC转染或HG诱导+si⁃TSP⁃4转染处理。通过ELISA测量IL⁃1β（A）、TNF⁃α（B）和IL⁃6（C）的相对
                表达水平。两组比较，P＜0.05（n=3）。
                               *
                                             图 4 干扰TSP⁃4抑制HG诱导的足细胞炎症反应
                             Figure 4 Knockdown of TSP⁃4 inhibits HG⁃induced inflammatory response in podocytes


                种经典的转录因子，它通过靶向基因表达来介导                             基化终产物（AGE），并不断积累             ［11］ 。同时，在 AGE
                基因表达。发现 p⁃STAT3 在 HG 诱导的足细胞中                      的产生过程中，线粒体会释放大量的 ROS。过量的
                呈时间依赖性上调（图 5A、B）。加入 STAT3 激动                      ROS 最终会导致氧化和抗氧化系统失衡，从而导致
                剂 Colivelin 后，TSP⁃4 的表达水平明显上调，抑制                  细胞受损。氧化应激可直接导致足细胞凋亡，或通
                STAT3 的表达可显著下调 TSP⁃4（图 5C、D），表明                   过肌动蛋白重排、内皮素⁃1合成增加或微血管通透
                STAT3可能介导TSP⁃4的转录。推测STAT3通过直                      性改变等间接引起足细胞凋亡               ［12］ 。本研究结果表
                接结合其启动子来激活 TSP⁃4 的表达水平。通过                         明，HG诱导的足细胞中ROS水平显著增加，可通过
                ChIP 检测分析，证实 STAT3 蛋白能够与 TSP⁃4 的启                 抑制 TSP⁃4 的表达而降低。这表明抑制 TSP⁃4 的表
                动子结合（图 5E）。此外，双荧光素酶报告基因检测                         达发挥了抗氧化作用。
                阐明 STAT3 激活了野生型 TSP⁃4 的启动子，而不是                        氧化应激与炎症反应密切相关，它们的协同作
                突变型 1（图 5F、G）。故足细胞中的 TSP⁃4 可以被                    用引发了 DKD 的恶化。全身和局部炎症反应都参
                STAT3激活。                                          与了DKD的发展。以往研究表明，DKD患者肾脏中
                                                                  过量的ROS会诱导炎症细胞的浸润和募集，从而进
                3  讨 论
                                                                  一步加速IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α和NF⁃κB等促炎因子的
                    DKD的全球死亡率相对较高。更重要的是，随                         产生，并启动DKD的发作           ［13］ 。血浆IL⁃6和TNF⁃α也
                着发病率的逐年增加，医疗费用增多。DKD的发病                           有助于 DKD 的进展。它们能够提高系膜细胞的增
                机制非常复杂且不确定，涉及多种类型细胞和各种                            殖率，扩大细胞外基质，重要的是通过在正反馈回
                因素  ［9-10］ 。本研究发现，TSP⁃4 在 HG 诱导的足细胞               路中产生ROS来增加内皮细胞通透性                ［14］ 。NF⁃κB是
                中显著上调，从而加剧了足细胞的凋亡和炎症反                             启动糖尿病炎症反应的主要转录因子。它在DKD患
                应。文献报道HG刺激导致细胞中大量产生晚期糖                            者的肾脏中上调，可以调节黏附分子和促炎因子如
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