Page 62 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第8期
·1104 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年8月

现 RAD51⁃AS1 在 hBMSC 中表达量较高，且相较于 A
正常人的hBMSC，lncRNA RAD51⁃AS1在OP患者的 ***
hBMSC显著下调（图3A）。 10
为了探究 RAD51⁃AS1 在 hBMSC 中的作用，使 RAD51⁃AS1相对表达量 15
用Smart Silencer，其中包括3条小干扰和3条反义寡 5
核苷酸，防止对 RAD51⁃AS1 的脱靶效应。通过转
染，在 hBMSC 中下调 RAD51⁃AS1 的水平，以转染打
0
乱序列的小干扰作为对照。同时实时定量 PCR 检 正常人（n=10） OP患者（n=10）
测干扰效率。结果显示，转染干扰RAD51⁃AS1表达 B 1.5
的 hBMSC，RAD51⁃AS1 的表达水平显著下调（图
3B），证实其对RAD51⁃AS1干扰效果显著。 1.0 ***

2.4 沉默RAD51⁃AS1对hBMSC增殖的影响 RAD51⁃AS1相对表达量
为了检测 RAD51⁃AS1 对 hBMSC 增殖的影响，
沉默 RAD51⁃AS1 表达后进行了 MTT 及克隆形成实 0.5
验研究 hBMSC 的增殖活力。MTT 结果显示，沉默
RAD51⁃AS1 后，相较于转染对照组，细胞的增殖活 0
力明显降低（图4A）。通过计算细胞克隆形成，发现 si⁃NC si⁃RAD51⁃AS1
A：10例正常人及10例OP患者的骨髓间充质干细胞中RAD51⁃
沉默 RAD51⁃AS1 后，hBMSC 的克隆形成能力减弱 AS1 的表达情况；B：在骨髓间充质干细胞中沉默 RAD51⁃AS1 的表
（图4B）。 达。两组比较， P＜0.001。
***
2.5 沉默RAD51⁃AS1对hBMSC成骨分化的影响 图3 RAD51⁃AS1在骨髓间充质干细胞的表达及差异
为了探究 RAD51⁃AS1 在 hBMSC 中对成骨分化 Figure 3 The expression and differences of RAD51⁃AS1
的影响，在体外使用成骨诱导液，诱导 hBMSC 成骨 in hBMSC
分化。在第5天的时候对其进行ALP染色。根据图 发现PI3K⁃Akt及cAMP信号通路在骨质疏松中的发
所示，可以看出沉默 RAD51⁃AS1 后，ALP 的活性显 挥中重要作用。通过对差异表达的 lncRNA 进行筛
著降低（图5）。 选，发现 lncRNA RAD51⁃AS1 在骨质疏松患者中显
著下调，并使用体外实验，发现RAD51⁃AS1对hBM⁃
3 讨 论
SC的增殖及成骨分化的能力。
本 研 究 通 过 从 GEO 数 据 库 中 的 基 因 芯 片 通过富集分析结合可以看出，PI3K⁃Akt 信号通
GSE35956 进行 lncRNA 重注释和生物信息学分析， 路及 cAMP 信号通路在 OP 的发展中起到重要作
得到了mRNA和lncRNA的差异表达基因，并利用富 用。既往研究显示，PI3K/Akt/mTOR 在控制细胞生
集分析对 mRNA DEG 进行了 GO 分析和 KEGG 分 长、增殖、生存、代谢、血管生成、转录和翻译方面发挥
析，挖掘其具体的生物过程、分子功能和信号通路， 着关键作用。mTOR抑制剂被证明可以积极调节破
A B si⁃NC si⁃RAD51⁃AS1
0.6
si⁃NC
si⁃RAD51⁃AS1 ***
nm ） 0.4

（ 490 ***
D 0.2 ***

0
0 1 2 3 4
时间（d）
A：MTT实验检测沉默RAD51⁃AS1后对骨髓间充质干细胞增殖活力的影响；B：平板克隆形成实验检测沉默RAD51⁃AS1后对骨髓间充质
干细胞增殖的影响。
图4 沉默RAD51⁃AS1影响骨髓间充质干细胞的增殖能力
Figure 4 Silencing of RAD51⁃AS1 affects the proliferative ability of hBMSC