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第42卷第8期 高明明，俞兆儿，姚 丹，等. 环状RNA hsa_circ_0005579在子痫前期患者胎盘中的表达及对滋养层
2022年8月 细胞增殖、迁移及侵袭的影响［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（08）：1112-1118 ·1113 ·

RNA hsa_circ_0005579 is highly expressed in the placenta of patients with pre ⁃ eclampsia，and the proliferation，migration and
invasion ability of HTR ⁃ 8/SVneo is enhanced after silencing hsa_circ_0005579. It is expected to provide new targets for early
diagnosis and intervention of pre⁃eclampsia.
［Key words］ circular RNA；circ_0005579；trophoblast cells；preeclampsia
［J Nanjing Med Univ，2022，42（08）：1112⁃1118］

子痫前期（pre⁃eclampsia，PE）是一种妊娠期特
1 材料和方法
有疾病，通常在妊娠第 20 周开始出现新发高血压，
［1］
伴有或不伴有蛋白尿 ，是导致孕产妇发病和死亡 1.1 材料
的主要原因之一 。然而，PE的发病机制尚未完全 人 绒 毛 膜 滋 养 层 HTR ⁃ 8/SVneo 细 胞（货 号
［2］
明确，越来越多的研究表明，受损的螺旋动脉重塑、 ZQ0482，上 海 中 乔 新 舟 生 物 科 技 有 限 公 司）。
胎盘功能障碍和滋养层侵袭不足在疾病的发生和 DMEM 培养基、澳洲胎牛血清（Gibco 公司，美国）；
发展中起着关键作用 。此外，母胎界面绒毛外滋 TRIzol 试剂、Lipofectamine 3000（Invitrogen 公司，美
［3］
养层细胞在胎盘发育过程中起重要作用，它们有限 国）；逆转录试剂盒及实时定量PCR（qRT⁃PCR）荧光
的迁移和侵袭能力可导致异常的螺旋动脉重构和 染料（Thermo 公司，英国）；RNase R（Epicentre 公司，
缺陷性的滋养层侵袭，从而导致 PE 的发生 。因 美国）；circ_0005579的小干扰 RNA（small interfering
［4］
此，有必要揭示滋养细胞迁移和侵袭失调的病理生 RNA，siRNA）及其阴性对照（siRNA⁃NC）（上海吉满
理学机制。 生物科技有限公司）；PCR 引物（南京锐真生物技术
环状RNA（circRNA）普遍存在于哺乳动物细胞 有限公司）；CCK⁃8 检测试剂盒（DOJINDO 公司，日
中，参与转录和转录后水平的基因表达调控 ［5-6］ ，可 本）；EdU 试剂盒（广州市锐博生物科技有限公司）；
以通过一个或多个外显子、外显子和内含子序列或 基质胶（Corning公司，美国）；结晶紫染液、蛋白酶抑
内含子序列反向剪接形成特殊的闭合环状结构 ， 制剂（北京索莱宝科技有限公司）；RIPA 裂解液、
［7］
不存在 5′帽端和 3′多聚腺苷酸（Poly A）尾，能耐受 BCA 蛋白定量试剂盒（碧云天生物技术研究所）；
核酸外切酶的消化降解，比线性核糖核酸（linear circ_0005579 的所有抗体（Abcam 公司，英国）；硝酸
RNA）和微小核糖核酸（miRNA）更加稳定 ，被认为 纤维素膜、超敏电化学发光液（electrochemical lumi⁃
［8］
是极具前景的疾病生物标志物 。研究表明环状 nescence，ECL）（Millipore 公司，美国）。Synergy H4
［9］
RNA在包括PE在内的许多疾病中起着至关重要的 多功能酶标仪（BioTek 公司，美国）；荧光正置及倒
作用，研究发现circVRK1通过作为miR⁃221⁃3p的内 置显微镜（Carl Zeiss公司，德国）；3422型24孔Tran⁃
源竞争 RNA 调节 PTEN 来抑制滋养层细胞迁移、侵 swell 小室（Corning 公司，美国）；EVOS XL Core 型倒
袭和上皮间质转化 ［10］ ；据报道，circLARP4 和 miR⁃ 置显微镜（Invitrogen 公司，美国）；小型垂直电泳仪
424 相互作用影响胃癌细胞的增殖和侵袭 ［11］ ；研究 （Bio⁃Rad公司，美国）。
表明 hsa_circ_0013958 可能是肺腺癌早期诊断和预 1.2 方法
防的潜在分子标志物 ［12］ 。因此，深入研究 circRNA HTR⁃8/SVneo 细胞在添加有 10%胎牛血清的
在 PE 发生中的变化及作用，有可能为 PE 的早期诊 DMEM 培养基中于 37 ℃、5%CO2的环境中培养，使
断和干预提供新的靶标 用 Lipofectamine 3000 进行转染，实验分为干扰组
2016 年，本课题组鉴定了胎盘组织中 301 个差 （si⁃circRNA）和干扰对照组（siRNA⁃NC），转染浓度
［13］
异表达的环状 RNA ，hsa_circ_0005579 即为显著 为 50 nmol/L，转染后 24 h 收集细胞用于 HTR⁃8/SV⁃
上调的环状 RNA 之一，尚未有文献深入研究其功 neo 细胞的表型验证。靶向 hsa_circ_0005579 的干
能。本研究检测了环状RNA_0005579在子痫前期患 扰 序 列 ：siRNA#1F，5′ ⁃ GUGUUAAUGAUGAGA⁃
者胎盘中的表达情况，探讨干扰hsa_circ_0005579的 ACUGGATT⁃3′；R，5′⁃UCCAGUUCUCAUCAUUAA⁃
表达对 HTR⁃8/SVneo 细胞增殖、迁移和侵袭能力的 CACTT ⁃ 3′ ；siRNA#2F，5′ ⁃ UAAUGAUGAGAACUG⁃
影响，为PE的诊断与治疗提供新的思路。 GACUGATT⁃3′；R，5′⁃UCAGUCCAGUUCUCAUCAU⁃