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第42卷第8期 高明明，俞兆儿，姚 丹，等. 环状RNA hsa_circ_0005579在子痫前期患者胎盘中的表达及对滋养层
2022年8月 细胞增殖、迁移及侵袭的影响［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（08）：1112-1118 ·1115 ·
用 qRT⁃PCR 检测了 hsa_circ_0005579 在 PE 胎 HTR⁃8/SVneo 细胞提取的互补 DNA（cDNA）和基因
盘和正常妊娠胎盘中的表达水平，结果显示，与正 组 DNA（gDNA）为模板，凝胶电泳结果显示 circ_
常妊娠胎盘相比（1.00±0.55，n=20），PE 孕妇胎盘中 0005579 仅由 cDNA 扩增而不是由 gDNA 扩增（图
circ_0005579的表达明显上调（2.04±0.92，n=20），差 1D），说明 circ_0005579 的环状结构是反向剪接产
异有统计学意义（图 1A），提示 hsa_circ_0005579 的 生的。
表达与PE的发生密切相关。 2.3 hsa_circ_0005579 调控 HTR⁃8/SVneo 细胞的
2.2 hsa_circ_0005579的鉴定及特征 增殖能力
如图 1B 所示，hsa_circ_0005579 长度为 660 个 为了进一步研究 hsa_circ_0005579 对 PE 的影
碱基对（bp），由其宿主基因半胱氨酸丰富跨膜BMP 响 ，在 HTR ⁃ 8/SVneo 细 胞 中 干 扰 掉 hsa_circ_
调节因子 1（cysteine rich transmembrane BMP regula⁃ 0005579，探索其对细胞增殖的影响。首先，检测了
tor 1，CRIM1）中的 4 个外显子反向剪接而成，通过 转染 si⁃NC、si⁃circ _ 0005579（si⁃circ_0005579#1、si⁃
sanger 测序证实了剪接接头的序列，环化位点与其 circ_0005579#2 和 si⁃circ_005579#3）后 HTR⁃8/SV⁃
碱 基 数 据 一 致 。 然 后 进 一 步 评 估 了 hsa_circ_ neo 细胞中 hsa_circ_005579 的水平，评估转染效
0005579 的稳定性，RNase R 处理后，与线性形式的 率。结果显示，相对于 si⁃NC 组，hsa_circ_0005579
Linear mRNA 相比，circ_0005579 对 RNase R 消化降 的表达在si⁃circ_0005579组显著下调（图2A），说明
解具有抗性，这也表明 circ_0005579 是高度稳定的 干扰成功，且si⁃circ_0005579#3的干扰效率最佳，干
（P＜0.05，图 1C）。 为 了 证 实 组 织 、细 胞 中 存 在 扰效率高达83.5%。
hsa_circ_0005579，设计了发散和收敛型引物，以 为了深入了解 circ_0005579 在 PE 发病过程中
表1 PE患者和正常产妇的临床特征比较
Table 1 Clinical characteristics of PE patients and normal pregnant women （x ± s）
特征 正常产妇（n=20） PE患者（n=20） P值
孕妇年龄（岁） 30.35 ± 3.42 31.75 ± 5.68 0.351
体重指数（kg/m） 26.93 ± 2.28 27.89 ± 1.77 0.145
2
收缩压（mmHg） 114.65 ± 9.14 161.05 ± 15.28 ＜0.001
舒张压（mmHg） 71.00 ± 7.34 103.50 ± 9.92 ＜0.001
胎儿出生体重（g） 3 214.50 ± 493.62 1 772.50 ± 486.67 ＜0.001
hsa_circ_0005579相对表达量 4 3 2 1 120 130 660 bp 140
A 5 *** B Exon2 Exon3 Exon1 Exon5
splicing site
C 0 Normal PE D
1.5 Mock * 1 000 bp cDNA gDNA cDNA gDNA
RNase R
RNA相对表达量 1.0 200 bp
100 bp
0.5
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circ_0005579 primers GAPDH primers
0.0
circ_0005579 Linear mRNA
A：与正常妊娠胎盘相比，PE 胎盘中的 hsa_circ_0005579 表达水平（n=20）；B：hsa_circ_0005579的预测剪接模式和剪接位点序列；C：circ_
0005579的稳定性；D：hsa_circ_0005579 的存在及剪切模式。两组比较，P < 0.05， P < 0.001。
***
*
图1 hsa_circ_0005579在PE患者胎盘中的表达水平及其特征与鉴定
Figure 1 The expression level of hsa_circ_0005579 in the placenta of PE patients and its characteristics and identification
