Page 77 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第8期 南京医科大学学报（自然科学版）
2022年8月 Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） ·1119 ·

·基础研究·

基于CRISPR/Cas13a技术检测肿瘤驱动基因TP53 R248W的研究

邝振展 ，肖 斌 ，孙朝晖 ，罗 镕 ，何洁雯 ，李林海 2*
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1 中国人民解放军南部战区总医院检验科，广东 广州 510010；广州医科大学附属第六医院（清远市人民医院）检验医学部，
广东 清远 511518；广州医科大学金域检验学院，广东 广州 510180；广州南方学院云康医学与健康学院，广东 广
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州 510970
［摘 要］ 目的：建立一种基于 CRISPR/Cas13a 的 TP53 R248W 变异体的快速检测技术。方法：根据 Over⁃lap PCR 技术，以
TP53野生型质粒为模板构建TP53 R248W变异体质粒；对TP53R248W变异体扩增产物大小，扩增反应条件及crRNA长度和浓
度进行优化，初步建立基于CRISPR/Cas13a的R248W变异体快速检测方法；利用不同突变率TP53 R248W变异体及模拟血浆
ctDNA，评价 CRISPR/Cas13a 方法的检测灵敏度。结果：建立的 CRISPR/Cas13a 方法成功检测出产物大小为 368 bp 的 TP53
R248W片段；在0.05~0.25 μmol/L浓度范围内，crRNA浓度越高，检测结果相对荧光值越高；该方法检测TP53 R248W变异体的
灵敏度为1×10 拷贝/μL，最低可以检测出突变率为0.01%的变异体。结论：建立的CRISPR/Cas13a方法具有快速、简便、灵敏、
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特异等优点，为组织和血浆中的TP53 R248W变异体的检测提供了新的技术手段。
［关键词］ CRISPR/Cas13a；TP53 R248W；crRNA；快速检测
［中图分类号］ R446.7 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2022）08⁃1119⁃06
doi：10.7655/NYDXBNS20220811

Detection of tumor driver gene TP53 R248W by CRISPR/Cas13a

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KUANG Zhenzhan ，XIAO Bin ，SUN Zhaohui ，LUO Rong ，HE Jiewen ，LI Linhai 2*
1 Department of Clinical Laboratory，General Hospital of the Southern Theater Command of the People’s Liberation
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Army，Guangzhou 510010；Department of Laboratory Medicine，the Sixth Affiliated Hospital of Guangzhou Medical
University（Qingyuan People’s Hospital），Qingyuan 511518；Jinyu College of Laboratory Science，Guangzhou
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Medical University，Guangzhou 510180；Yunkang School of Medicine and Health，Guangzhou Nanfang University，
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Guangzhou 510970，China
［Abstract］ Objective：To establish a CRISPR/Cas13a based method for detecting TP53 R248W mutant molecules. Methods：TP53
R248W mutant plasmid was constructed by Over⁃lap PCR using TP53 wild⁃type plasmid as template. The CRISPR/Cas13a method for
the detection of TP53 R248W variant was initially established by optimizing the amplification product size，amplification technology，
the length and concentration of crRNA. The sensitivity of CRISPR/Cas13a method was evaluated by TP53 R248W variants with
different mutation rates and simulated plasma ctDNA. Results：The size of the amplified product detected by CRISPR/Cas13a was
about 368 bp. The concentration of crRNA had influence upon the detection intensity of CRISPR/Cas13a. In the range of 0.05~0.25 μmol/L，
the higher the concentration of crRNA，the higher the detection intensity of CRISPR/Cas13a was detected. The sensitivity of CRISPR/
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Cas13a in detecting TP53 R248W variants was 10 copies/μL，and the minimum mutation rate was 0.01% . Conclusion：The
established CRISPR/Cas13a method has the advantages of rapid，simple，sensitive and specific，and provides a new technology for the
detection of TP53 R248W variant in tissues and plasma.
［Key words］ CRISPR/Cas13a；TP53 R248W；crRNA；rapid detection
［J Nanjing Med Univ，2022，42（08）：1119⁃1124］

［基金项目］ 全军保健专项科研课题（18BJZ4）；广东省医学科学技术研究基金项目（B2019139）；全军卫勤保障能力创新与生
成项目（20WQO29）；后勤科研开放项目（BLB19J009）
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通信作者（Corresponding author），E⁃mail：mature303@126.com