Page 82 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第8期
·1124 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年8月

端，并引入新的错配碱基 C，结果发现，当 crRNA 的 112461
间隔序列的5′末端与 野生型 RNA之间有两个错配 ［6］ TAMBE A，EAST⁃SELETSKY A，KNOTT G J，et al. RNA
碱基，而与变异体 RNA 之间只有一个错配碱基时， binding and HEPN⁃nuclease activation are decoupled in
可以有效地区分野生型和变异体。另外，本研究发 CRISPR⁃cas13a［J］. Cell Rep，2018，24（4）：1025-1036
［7］ YIN L，ZHAO F，SUN H，et al. CRISPR⁃Cas13a inhibits
现 crRNA 浓度与 CRISPR/Cas13a 检测强度呈正相
HIV⁃1 infection［J］. Mol Ther⁃Nucl Acids，2020，2（4）：
关，在 0.05~0.25 μmol/L 范围内，crRNA 浓度越高，
147-155
CRISPR/Cas13a检测强度越大。
［8］ WANG M，ZHANG R，LI J. CRISPR/cas systems redefine
通过混合 TP53 野生型和 R248W 变异体，构建 nucleic acid detection：principles and methods［J］. Bio⁃
了不同突变频率的 TP53 R248W 变异体，结果显示 sens Bioelectron，2020，165（1）：112430-112487

CRISPR/Cas13a 方法最低可检出突变频率为 0.01% ［9］ HABIBZADEH P，MOFATTEH M，SILAWI M，et al. Mo⁃
的 TP53 R248W 变异体（1×10 copies），与同类型报 lecular diagnostic assays for COVID⁃19：an overview［J］.
3
道检测的灵敏度相当 ［13］ 。最后，通过对模拟血浆 Crit Rev Cl Lab Sci，2021，58（6）：1-20
ctDNA的检测，发现CRISPR/Cas13a检测方法可以在 ［10］ WANG X，SHANG X，HUANG X. Next⁃generation patho⁃
gen diagnosis with CRISPR/Cas⁃based detection methods
4
血浆中检测出浓度为1×10 copies/μL的TP53 R248W
［J］. Emerg Microbes Infec，2020，9（1）：1682-1691
变异体，为下一步临床样本的检测提供重要依据。
［11］ MUSTAFA M I，MAKHAWI A M. SHERLOCK and DE⁃
综上所述，本研究建立的CRISPR/Cas13a检测方
TECTR：CRISPR⁃cas systems as potential rapid diagnos⁃
法能够快速、灵敏且高效地检出 TP53 R248W 变异 tic tools for emerging infectious diseases［J］. J Clin Micro⁃
体，有效区分 TP53 R248W 变异体与 TP53 野生型， biol，2021，59（3）：e720-e745
从而为TP53 R248W突变肿瘤的诊断及治疗提供极 ［12］ ZHOU L，PENG R，ZHANG R，et al. The applications of
大帮助。另外，本研究建立的方法学也可应用于其 CRISPR/Cas system in molecular detection［J］. J Cell
他肿瘤驱动基因变异体的检测，从而为肿瘤基因检 Mol Med，2018，22（12）：5807-5815
［13］ GOOTENBERG J S，ABUDAYYEH O O，KELLNER M J，
测提供了新的、多样性的技术手段。
et al. Multiplexed and portable nucleic acid detection plat⁃
［参考文献］ form with Cas13，Cas12a，and Csm6［J］. Science，2018，

［1］ XU A，ZHOU R，TU J，et al. Establishment of a human 360（6387）：439-444
embryonic stem cell line with homozygous TP53 R248W ［14］ FOZOUNI P，SON S，DÍAZ D L D M，et al. Amplification⁃
mutant by TALEN mediated gene editing［J］. Stem Cell free detection of SARS⁃CoV⁃2 with CRISPR⁃Cas13a and
Res，2018，29（5）：215-219 mobile phone microscopy［J］. Cell，2021，184（2）：323-
［2］ CROESSMANN S，WONG H Y，ZABRANSKY D J，et al. 333
PIK3CA mutations and TP53 alterations cooperate to in⁃ ［15］ KE Y，HUANG S，GHALANDARI B，et al. Hairpin⁃spac⁃
crease cancerous phenotypes and tumor heterogeneity［J］. er crRNA ⁃ enhanced CRISPR/Cas13a system promotes
Breast Cancer Res Tr，2017，162（3）：451-464 the specificity of single nucleotide polymorphism（SNP）
［3］ DE SOUZA C，MADDEN J A，MINN D，et al. The P72R identification［J］. Adv Sci，2021，8（6）：2003611-
polymorphism in R248Q/W p53 mutants modifies the mu⁃ 2003621
［16］ 吴晓东，杜秋明，郑秀红，等. 猪附红细胞体重组酶介导
tant effect on epithelial to mesenchymal transition pheno⁃
等温扩增技术（RAA）荧光检测方法的建立［J］. 中国兽
type and cell invasion via CXCL1 expression［J］. Int J
Mol Sci，2020，21（21）：8025-8042 医学报，2020，287（11）：99-103
［4］ YE P，CAI P，XIE J，et al. The diagnostic accuracy of digi⁃ ［17］ SAIFULLAH，SAKARI M，SUZUKI T，et al. Effective
tal PCR，ARMS and NGS for detecting KRAS mutation in RNA knockdown using CRISPR ⁃ Cas13a and molecular
cell⁃free DNA of patients with colorectal cancer：A sys⁃ targeting of the EML4⁃ALK transcript in H3122 lung can⁃
tematic review and meta⁃analysis［J］. PLoS One，2021，16 cer cells［J］. Int J Mol Sci，2020，21（23）：8904-8921
（3）：e248775-e248778 ［18］ GOOTENBERG J S，ABUDAYYEH O O，LEE J W，et al.
［5］ VAN DONGEN J E，BERENDSEN J T W，STEENBER⁃ Nucleic acid detection with CRISPR ⁃ Cas13a/C2c2［J］.
GEN R D M，et al. Point⁃of⁃care CRISPR/Cas nucleic ac⁃ Science，2017，356（6336）：438-442
id detection：recent advances，challenges and opportuni⁃ ［收稿日期］ 2021-06-30
ties［J］. Biosens Bioelectron，2020，166（15）：112445- （本文编辑：唐 震）