Page 27 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第10期 邵宇云，王 涵，王 潇，等. Notch1在对乙酰氨基酚诱导的肝损伤中的作用及机制［J］.
2023年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（10）：1350-1355，1365 ·1353 ·

A 原代肝细胞 B C
Notch1 FL/FL Notch1 M⁃KO
Notch1 FL/FL Notch1 M⁃KO FL/FL
100 15 Notch1
Notch1 110 kDa Notch1 M⁃KO
β⁃actin 45 kDa （ % ） PBS 10 ***
存活率 50 FL/FL 100μm 100μm
肝脏巨噬细胞 Notch1 M⁃KO Suzuki评分
Notch1 FL/FL Notch1 M⁃KO Notch1 5
0
Notch1 110 kDa 0 20 40 60 80 APAP
β⁃actin 45 kDa 时间（h） 0
100μm 100μm PBS APAP
D E
Notch1 FL/FL Notch1 M⁃KO
（ ×100 ）

Notch1 FL/FL Notch1 FL/FL PBS
10 000 Notch1 M⁃KO 10 000 Notch1 M⁃KO 100μm 100μm Notch1 FL/FL
*** *** （ % ） 50 M⁃KO ***
8 000 8 000 （ ×100 ） Notch1
（ U/L ） 6 000 （ U/L ） 6 000 40
30
AST 4 000 ALT 4 000 100μm 100μm CD11b + 细胞百分比 20
2 000 2 000 （ ×200 ）APAP 10
0 0 0
PBS APAP PBS APAP PBS APAP
APAP 30μm 30μm

A：免疫印迹法检测Notch1在原代肝细胞和肝巨噬细胞中的表达（n=3）；B：生存分析法比较Notch1 FL/FL 与Notch1 M⁃KO 小鼠死亡率（n=6）；C：肝
组织HE染色（×200），Suzuki评分评估肝组织损伤程度（n=6）；D：血清转氨酶AST、ALT检测（n=6）；E：免疫荧光染色观察CD11b 巨噬细胞的表
+
达（n=4）。两组比较， P < 0.001。
***
图1 Notch1 M-KO 加重APAP诱导的肝损伤及炎性细胞浸润
Figure 1 Myeloid⁃specific Notch1 knockout exacerbates APAP⁃induced liver injury and immune cell accumulation

2.3 Notch1 M⁃KO 通过激活 TAK1 信号抑制细胞坏死 显升高，差异具有统计学意义（图 3A~D）。进一步
性凋亡 通过DCF探针检测原代肝细胞ROS情况，结果显示
Notch1 敲除后，APAP 处理组小鼠肝组织中 Notch1 M⁃KO 小鼠肝细胞的ROS水平明显升高（P < 0.01，
p⁃TAK1 表达水平明显升高（P < 0.001），同时伴有 图3E）。
p⁃p65 表达上调（图 2A），但 Casp⁃8 表达受到抑制，
3 讨 论
RIPK1 和 p⁃MLKL 的表达上调（P < 0.001，图 2A）。
而 PBS 处理的 Notch1 FL/F 和 Notch1 M⁃KO 小鼠肝组织中 AILI可能不是DILI首位病因，却是导致急性肝
p⁃TAK1、p⁃p65、Casp⁃8、RIPK1 和 p⁃MLKL 蛋白的表 损伤的主要病因之一 。在美国，46%的急性肝损
［3］
达未见明显差异。说明APAP可激活坏死性凋亡通 伤是服用过量APAP导致的 ［11］ 。急性肝损伤随后引
路，导致肝细胞坏死增加，符合组织学结果。进一 起各种并发症甚至是多器官衰竭，进一步危及患者
步通过免疫荧光染色检测 p⁃TAK1 在肝组织中表 生命，最终需要行肝移植手术，而肝源缺乏导致只

达情况，经 APAP 腹腔注射的 Notch1 M⁃KO 小鼠肝组织 有少数患者才能得到救治。因此，进一步研究AILI
中p⁃TAK1阳性的细胞明显增多（P < 0.001，图2B）。 发病机制，为临床提供潜在治疗靶点和预防策略显

结合Western blot和免疫荧光染色结果，说明Notch1 得非常重要。
敲除后，激活 p⁃TAK1 的表达促进肝脏细胞凋亡坏 本研究通过对 Notch1 特异性敲除小鼠腹腔注
死，加重APAP诱导肝损伤的发生。 射 APAP 构建 AILI 动物模型。研究发现，与 PBS 处
2.4 Notch1 M ⁃ KO 加重全身炎症反应及原代肝细胞 理组相比，APAP 处理组小鼠肝脏病理提示肝细
ROS产生 胞水肿及肝细胞坏死，伴炎性细胞浸润，说明 AILI

与Notch1 FL/FL +APAP组小鼠相比，Notch1 M⁃KO +APAP 造模成功。与Notch1 FL/FL +APAP组相比，Notch1 M⁃KO +
组小鼠血清中TGF⁃β1、IL⁃1β、IL⁃6、TNF⁃α的表达明 APAP 组小鼠肝组织损伤更严重，使用 Suzuki 量化