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第43卷第10期 何继凯，瞿文豪，贾佳琦，等. 丁酰胆碱酯酶在胃癌中的预后价值及其生物学功能分析［J］.
2023年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（10）：1356-1365 ·1357 ·

molecules. Enrichment analysis showed that the high expression of BCHE was related to cell proliferation，migration and adhesion. The
results of in vitro experiments further confirmed that reducing the expression of BCHE significantly inhibited the malignant biological
function of gastric cancer cell line. Conclusion：BCHE serve as a prognostic biomarker for GC and can promote immune cell
infiltration in tumors. In addition，reducing the expression of BCHE can inhibit its mediated malignant biological function.
［Key words］ BCHE；gastric cancer；prognosis；tumor⁃infiltrating immune cell
［J Nanjing Med Univ，2023，43（10）：1356⁃1365］

GC（gastric cancer，GC）是全球第5大癌症，死亡 系，使用TIMER2.0数据库（https：//cistrome.shinyapps.
率居全球第4位 ［1-2］ 。目前，GC的治疗方法主要包括 io/timer/） ［13］ 和 CIBERSORT 算 法 研 究 BCHE 和 免
手术、放疗和化疗，但术后局部复发或远处转移的 疫细胞浸润之间相关性，此外，利用 WGCNA 算
［3］
发生率超过40% 。此外，放疗和化疗后会出现明 法和DAVID Bioinformatics Resources数据库（https：//
显的不良反应，导致晚期GC患者的5年生存率仅约 david.ncifcrf.gov/） 对BCHE基因进行Gene Ontology
［14］
20% ［4-5］ 。因此，寻找GC新的治疗和预后靶点以提高 （GO）和 Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes
患者的生存率，已成为一项迫切的公共卫生问题。 （KEGG）分析。
为筛选出与 GC 预后相关的基因，本研究采用 1.2.2 qRT⁃PCR

多种分析方法发现，在GC中丁酰胆碱酯酶（bcylcho⁃ 使用细胞 RNA 提取试剂盒提取人 GC 细胞
linesterase，BCHE）具有良好的预后价值。BCHE 是 HGC27、MKN1和人正常胃上皮细胞GES⁃1的RNA，
一种由肝脏合成并分泌到血液中的血浆酶，主要表 再用逆转录试剂将RNA逆转录成cDNA，以GAPDH
［6］
达于外泌体和内质网 ，其半衰期约为 12 d，参考值 作为内参对BCHE进行qRT⁃PCR扩增。BCHE R：5′⁃
为 5 900~13 200 U/L ［7-8］ 。研究表明，口腔癌和乳腺 TGTTGCAGAGAATCGGAAATCAA⁃3′，F：5′⁃CCCA⁃
癌患者血清中 BCHE 的表达水平明显升高 ［9-10］ 。然 ATAAGCATGCAGAGCA⁃3′。GAPDH R：5′⁃GAAG⁃
而，BCHE 基因在GC中的表达水平、调控机制，以及 GTGAAGGTCGGAGTC⁃3′，F：5′⁃GGCTGTTGTCAT⁃
与临床治疗和预后的相关性仍不清楚。 ACTTCTCATGG⁃3′。采用2 -ΔΔCt 计算相对表达量。
1.2.3 细胞转染
1 材料和方法
利用siRNA靶向敲减BCHE基因。将细胞分为
1.1 材料 对照组、空载组（si⁃NC）和实验组（si⁃BCHE），收集处
本研究的GC 患者临床病理信息和基因转录组 理后的HGC27和MKN1细胞，并配制成2×10 个/mL
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数据都来源于UCSC Xena数据库的肿瘤基因组图谱 的细胞悬液，铺入 6 孔板中，每孔 2 mL。培养 24 h
（TCGA） 。 后，每孔滴加7.5 μL Lipo6000和7.5 μL siRNA，在培
［11］
人GC细胞系HGC27、MKN1和人正常胃上皮细 养箱中培养48 h后进行下一步实验。
胞系GES⁃1（武汉普诺赛生命科技有限公司）。qRT⁃ 1.2.4 CCK⁃8和克隆形成实验
PCR 试剂（南京诺唯赞生物科技股份有限公司）；小 CCK⁃8 实验：收集处理后的 HGC27 和 MKN1
干扰 RNA（small interfering RNA，siRNA）（上海吉玛 细胞，并配制成 2×10 个/mL 的细胞悬液，铺入 96 孔
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制药技术有限公司）；Lipo6000、CCK⁃8试剂（上海碧 板中，每孔 100 μL，分别在 24、48、72、96 h 后加入
云天生物公司）；基质凝胶（厦门模基生物科技有限 10 μL CCK⁃8试剂，在37 ℃下孵育2 h后检测450 nm
公司）。 的吸光度值。克隆形成实验：收集处理后的HGC27
1.2 方法 和 MKN1 细胞，并配制成 1×10 个/mL 的细胞悬液，
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1.2.1 生信数据处理 铺入6孔板中，每孔1 mL，观察到克隆体的外观后使
首先使用 Lasso 回归筛选预后基因 ［12］ ，并采用 用甲醛固定细胞，再用1%结晶紫对细胞进行染色，
Kaplan⁃Meier生存曲线和单因素、多因素Cox回归分 最后PBS洗涤3次并拍照。
析BCHE基因表达在GC中的预后价值；其次采用卡 1.2.5 细胞黏附实验
方检验验证BCHE mRNA与临床病理参数之间的关 96孔板每孔加入100 μL的1∶4基质凝胶，凝胶