Page 32 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第10期
·1358 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年10月

凝固后，收集处理过的 HGC27 和 MKN1 细胞，并配 回归分析，并将单因素分析中差异具有统计学意义
制成 1×10 个/mL 的细胞悬液，铺入 96 孔板中，每孔 （P < 0.05）的变量纳入多因素分析。BCHE 表达高
5
100 μL，随后置于细胞培养箱中孵育2、4和8 h，PBS 低与临床病理参数的关系采用卡方检验。P < 0.05
洗涤3次后，更换新的培养基后进行CCK⁃8检测。 为差异有统计学意义，每组实验重复3次。
1.2.6 迁移和侵袭实验
2 结 果
迁移实验：收集处理后的 HGC27 和 MKN1 细
胞，并配制成 2×10 个/mL 的细胞悬液，铺入 6 孔板 2.1 BCHE 与 GC 患者预后及临床病理参数的关联
5
中，每孔 2 mL，24 h 后使用灭菌的 200 μL 枪头垂直 性分析
于 6 孔板底部横线划线，更换无血清培养基，分别 首先通过 Lasso 回归分析筛选出 15 个与 GC 患
在0、12、24 h后使用荧光倒置显微镜拍照。侵袭实 者 总 生 存 期（overall survival，OS）有 关 的 基 因 ：
验：收集处理后的 HGC27 和 MKN1 细胞，并配制成 BCHE、GPX3、ADAMTS18、ASPA、CD36、SERPINE1、
1×10 个/mL 的无血清细胞悬液，将细胞加入铺有 CYP19A1、LRAT、CGB5、ANO3、SOX14、CYMP、
6
1∶8基质凝胶的Transwell上层小室中，每孔100 μL。 CFHR4、F13B和OTX2（图1A）；其次，根据生存曲线
小室的底部加入 500 μL 20％的血清培养基。培养 分析筛选出影响预后差异最显著的基因BCHE（P <
48 h 后，使用甲醛固定细胞，再用 0.1%结晶紫对细 0.001，图 1B），且发现 BCHE mRNA 高表达的 GC 患
胞进行染色，最后PBS洗涤3次并拍照。 者无进展生存期（P=0.001）、疾病特异性生存期
1.3 统计学方法 （P=0.002）和无病生存期（P=0.004）更短（图1C~E）。
所有统计分析都使用 R 软件（4.1.2 版本）和 进一步分析发现，BCHE mRNA 在肿瘤组织中的表
GraphPad Prism 8进行，符合正态分布的数据资料以 达 水 平 高 于 癌 旁 组 织（P < 0.001），同 时 BCHE
均数±标准差（x ± s）表示，两组间比较采用独立样本t mRNA 在晚期GC（Ⅲ/Ⅳ期）患者中的表达水平高于
检验，多组间比采用单因素方差分析，组间两两比较 早 期 GC（Ⅰ/Ⅱ 期）患 者（P=0.020，图 1F）。 根 据
采用LSD⁃t检验。根据中位数将BCHE mRNA在GC BCHE mRNA 在 GC 组织中表达水平的中位数将患
组织中的表达水平分为高表达组和低表达组 ［15-18］ 。 者分为高表达组和低表达组，分析 BCHE mRNA 的
生存分析采用 Kaplan⁃Meier 法并进行 log⁃rank 检 表达与GC患者临床病理学参数之间的关系。结果
验。使用 R 包“forestplot”进行单因素和多因素 Cox 表明，BCHE mRNA 的高表达与 T 分期（P=0.029）、

A B C
221 201 184 152 131 95 63 42 26 21 15 8 3 3 0
100 低表达组（n=203） 100 低表达组（n=203）
0.75 （ % ） 75 高表达组（n=204） （ % ） 75 高表达组（n=204）
部分似然偏差 0.65 总生存率 50 P < 0.001 无进展生存率 50 P=0.001
25
25
0.55
HR=1.77，95CI%：1.25~2.51
HR=1.77，95CI%：1.28~2.40
0.45 0 低 195 21 31 10 5 66 2 2 1 1 0 低 194 22 25 49 10 5 64 2 2 1 1
高
高
42
194
194
-5.5 -5.0 -4.5 -4.0 -3.5 -3.0 0 30 60 90 120 0 30 60 90 120
log2λ 时间（月） 时间（月）
D E F
（ % ） 100 低表达组（n=203） （ % ） 100 低表达组（n=120） 15 P<0.001 P=0.020
高表达组（n=121）
高表达组（n=204）
疾病特异性生存率 50 0 P=0.002 64 无病生存率 50 0 P=0.004 116122 BCHE mRNA表达水平 10 5 0
75
75
25
25
HR=1.89，95CI%：1.25~2.88
HR=2.48，95CI%：1.31~4.69
22
低
1
2
31
7
42
2
1
高
高
1
1
4
120
22
183
30
2
1
0 182 30 10 5 90 120 低 0 119 30 60 90 120 癌 癌旁 Ⅰ/Ⅱ期 Ⅲ/Ⅳ期
60
时间（月） 时间（月） （n=407）（n=143） （n=159）（n=182）
A：Lasso回归模型筛选GC预后相关基因；B：生存曲线分析BCHE表达与GC患者的总生存期情况；C：生存曲线分析BCHE表达与GC患者
疾病无进展生存期情况；D：生存曲线分析BCHE表达与GC患者疾病特异性生存期情况；E：生存曲线分析BCHE表达与GC患者无病生存期情
况；F：BCHE mRNA在癌/癌旁组织和早期（Ⅰ/Ⅱ）/晚期（Ⅲ/Ⅳ）GC患者癌组织中的表达水平。
图1 BCHE mRNA在GC中的表达水平及相关生存分析
Figure 1 The expression of BCHE mRNA and related survival analysis in GC