Page 43 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第10期 张芙蓉，苟黎明，李 妍，等. 利用CRISPER/Cas9技术构建肝脏特异性敲入Lcat基因小鼠［J］.
2023年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（10）：1366-1371 ·1369 ·

2.3 肝脏特异性敲入 Lcat 小鼠不同组织的 Lcat 150 Ctrl
mRNA水平 Lcat CKI
为确定小鼠各组织 Lcat 转录水平的差异，根据
核酸电泳结果，筛出基因型带Cre的敲入（knock⁃in， mRNA相对表达量 100
KI）小鼠，以未携带 Cre 的 KI/WT 或 KI/KI 鼠作为对
照，依次提出心脏、肝脏、肾脏、脑、棕色脂肪的RNA， 50
将其进行逆转录，并将得到的 cDNA 进行 qPCR，结 Lcat
果以小鼠心脏内 Lcat 表达为比较基准，提示在对照
组小鼠中，Lcat主要由肝脏特异性表达，而在肝脏特 0
心 肝 肾 脑 棕色脂肪
异性敲入 Lcat 小鼠的肝脏内，Lcat 的 RNA 水平显著
图3 小鼠各组织Lcat mRNA表达水平
增加（图3）。
Figure 3 The relative expressions of Lcat mRNA in multi⁃
2.4 肝脏特异性敲入Lcat小鼠不同组织的LCAT蛋
ple tissues of mice
白水平
为探究肝脏特异性敲入小鼠与对照组相比各 示，在肝脏特异性敲入 Lcat 小鼠体内，除肝外，心、
组织LCAT蛋白水平的差异，依次提取各组织蛋白， 肾、脑和脾中也出现了 LCAT 的高水平表达（图 4）。
并通过Western blot检测LCAT的表达差异。结果显 提示 LCAT 作为一种分泌性蛋白，可通过血液循环

A 心 B 1.8 5
心LCAT蛋白相对表达量 脑LCAT蛋白相对表达量
Ctrl Lcat CKI 1.6 4
LCAT 50 kDa
β⁃actin 42 kDa 1.4 3
肝 1.2 2
Ctrl Lcat CKI 1.0 1
LCAT 50 kDa
0.8 0
β⁃actin 42 kDa Ctrl Lcat CKI Ctrl Lcat CKI
肾
2.0 2.5
Ctrl Lcat CKI
肝LCAT蛋白相对表达量 1.0 脾LCAT蛋白相对表达量
LCAT 50 kDa 1.5 2.0
β⁃actin 42 kDa 1.5
脑 1.0
Ctrl Lcat CKI 0.5 0.5
LCAT 50 kDa
0 0
β⁃actin 42 kDa Ctrl Lcat CKI Ctrl Lcat CKI
脾
5 1.5
Ctrl Lcat CKI
肾LCAT蛋白相对表达量 肌肉LCAT蛋白相对表达量 1.0
LCAT 50 kDa 4
β⁃actin 42 kDa 3
肌肉 2
Ctrl Lcat CKI
LCAT 50 kDa 1
0 0.5
β⁃actin 42 kDa
Ctrl Lcat CKI Ctrl Lcat CKI
A：Western blot检测对照组与肝脏特异性敲入Lcat小鼠各组织蛋白水平；B：对Western blot结果的统计学分析（n=3）。
图4 Western blot检测Lcat CKI小鼠组织中蛋白表达情况
Figure 4 The relative expressions of proteins in multiple tissues of Lcat CKI mice detected by Western blot