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第43卷第10期 吴 鑫，音海玲，殷 倩，等. 选择性磁珠纯化法结合高通量测序技术在无创产前筛查中的
2023年10月 应用［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（10）：1398-1401，1426 ·1401 ·

异常的风险。它的临床应用大大降低了侵入性产 带来的焦虑情绪，缩短了检测周转时间（turn⁃around
前诊断率。但由于本身 cffDNA 释放至母体外周血 time，TAT），提高了检测效率，有助于临床及时召回
液循环中含量较少，NIPT 检测时孕周范围多为孕 高风险病例。
12~20 周，因此由于母体血浆中 cffDNA 浓度达不到 对两组样本的高通量测序质控数据进行比较
NIPT 检测质控要求而重复采血的情况并不少见。 发现，游离DNA的GC比率无统计学差异，测序质量
有研究报道，不同检测平台 NIPT 初次检测失败率 指标Q30分别为传统纯化法组（97.05±0.49）%、片段
为 1%~8% ，目前对于初次 NIPT 失败病例则通常 选择富集法组（96.98±0.42）%，两组间差异无统计学
［8］
建议再次抽血，而再次抽血检测的成功率仍仅约为 意义。说明在样本制备环节，采用片段选择富集法
50%~60% 。所以如何高效富集母体外周血液中 不会对高通量测序的质量指标的稳定性产生影响。
［9］
cffDNA 以最大程度降低 NIPT 检测过程中的假阴性 根据胎儿产前诊断及分娩结局的随访，对NIPT
率和假阳性率，减轻孕妇家庭及社会负担是当前迫 筛查准确性进行比较，应用片段选择富集法前后，
切需要解决的问题。 胎儿目标染色体异常的阳性检出率并无显著差异
对孕妇血浆中不同类型 DNA 片段的分子特征 （0.36% vs. 0.32%），21 三体、18 三体和 13 三体的阳
研究提示，孕妇血浆中母源DNA 比cffDNA 片段长； 性预测值均无显著性差异。而两组均发生1例染色
孕妇血浆中游离DNA长度范围约在105~798 bp，而 体异常漏诊（0.02% vs. 0.01%，P=0.49）。由此提示，
cffDNA 长度范围约在 107~313 bp，其中< 193 bp 的 采用新的片段选择富集法在富集cffDNA的同时，并
约占 80% 。对短片段的游离 DNA 进行区分并纯 不会导致富集DNA质量的下降，也未影响染色体异
［3］
化是富集提取cffDNA的方法之一。 常识别的准确性。
磁珠法为常用的核酸纯化方法，磁珠法进行核 综上所述，本研究表明采用羧基化修饰的具有
酸纯化主要分为两类，其一为无差别的吸附和回 DNA 片段选择能力的纳米分选磁珠富集 cffDNA，
收，主要用于核酸的纯化和浓缩，其二为通过特殊 可以对短片段 cffDNA 进行有效富集，且不影响后
手段修饰磁珠以特异性吸附目的核酸。研究发现， 续高通量测序的稳定性，从而可以减少因 cffDNA
将纳米磁珠进行羧基化修饰后，控制纳米磁珠与样 浓度过低导致的重采血，提高检测效率。该法在保
本 DNA 的配比在特定范围区间时，可以分步骤，先 证cffDNA产物提取质量的同时，并不影响目标染色
特异性吸附长片段的游离核酸，再特异性吸附短片 体疾病的阳性预测值。
段的游离核酸，从而到达分离、纯化、富集cffDNA的 ［参考文献］
目的 ［4，6］ ，有文献报道，采用该方法富集小片段 DNA
［1］ 徐贵江，李 茜，张 坡，等. 基于高通量测序的无创产
［7］
可以将cffDNA浓度提高1倍以上 。
前诊断研究［J］. 中国优生与遗传杂志，2018，26（12）：
本研究从 2020 年 5 月开始，采用羧基化修饰
40-43
的具有 DNA 片段选择能力的纳米分选磁珠富集 ［2］ LO Y M，TEIN M S，LAU T K，et al. Quantitative analysis
cffDNA 用于 NIPT 筛查。按照是否使用该技术将病 of fetal DNA in maternal plasma and serum：implications
例分为传统纯化法组和片段选择富集法组，通过比 for noninvasive prenatal diagnosis［J］. Am J Hum Genet，
较发现，两组提取的 cffDNA 浓度分别为（341.59± 1998，62（4）：768-775
93.92）nmol/L和（252.52±120.76）nmol/L（P < 0.001）。 ［3］ ALLEN C K C，ZHANG J，HUI A B Y，et al. Size distribu⁃
分析原因，可能与两组 DNA 片段长度有关，片段选 tions of maternal and fetal DNA in maternal plasma［J］.
择富集后血浆 DNA 提取产物中以短片段 DNA 为 Clin Chem，2004，50（1）：88-92
［4］ 刘 莹，程 立，张 博. 基于新型磁分离技术的高分
主，其绝对质量相对较低，所以浓度也低。
辨率 DNA 片段筛选技术［J］. 生物技术通报，2021，37
通过比较还发现，采用传统纯化法期间，因
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cffDNA 浓度过低导致的复检抽血率为 0.56%，与文
［5］ ZHANG B，ZHAO S T，WAN H，et al. High⁃resolution
献报道的0.47%~0.50%接近 ［8，10］ ，采用新的片段选择
DNA size enrichment using a magnetic nano ⁃ platform
富集法以后，因cffDNA浓度过低导致的复检抽血率 and application in non⁃invasive prenatal testing［J］. Anal，
降低到 0.01%，与传统纯化法的差异有统计学意义 2020，145（17）：5733-5739
（P < 0.001）。DNA 片段选择性磁珠纯化法，通过富 ［6］ 张介中，李珊珊，玄兆伶，等. 一种具有片段选择性纯化
集孕妇血浆样本中的cffDNA，减少了孕妇再次抽血 （下转第1426页）