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南京医科大学学报（自然科学版）                                 第43卷第10期
               ·1402 ·                    Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences）  2023年10月


             ·临床研究·

              三种脊髓性肌萎缩症携带者筛查方法的性能评估



              孙瑞红 ，蒋      祝 ，邵彬彬 ，谭建新        2*
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                                     2
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               南京医科大学第一临床医学院医学检验学系，江苏                   南京   210029；南京医科大学附属妇产医院（南京市妇幼保健院）遗传
              1                                                     2
              医学中心，江苏 南京         210004


             ［摘    要］ 目的：比较 3 种分子遗传技术在脊髓性肌萎缩症基因携带者筛查检测中的检测性能。方法：采用微滴数字 PCR
             （droplet digital PCR，ddPCR）、高分辨率熔解曲线（high⁃resolution melting，HRM）与多重竞争性PCR联合毛细管电泳（PCR⁃based
              capillary electrophoresis，PCR/CE）技术检测 516 例样本中 SMN 基因拷贝数，并通过多重连接依赖探针扩增（multiple ligation⁃
              dependent probe amplification，MLPA）方法作为金标准技术验证结果。结果：ddPCR、HRM 和PCR/CE 检测SMN1第7号外显子
              的拷贝数与 MLPA 分析结果一致，灵敏度和特异度均为 100.0%。HRM 检测 SMN1 基因第 8 号外显子单拷贝的灵敏度和特异
              度为 100.0%和 99.5%，双拷贝的灵敏度和特异度为 99.4%和 100.0%，而大于双拷贝的灵敏度和特异度为 100.0%和 100.0%。
              PCR/CE可以同时检测SMN1和SMN2基因的第7、8号外显子，检测结果与MLPA结果完全一致，灵敏度和特异度均为100.0%。
              结论：本研究比较了 3 种分子遗传技术在 SMA 携带者筛查检测中的效能，为建立大规模人群的脊肌萎缩症携带者筛查技术
              选择提供依据。
             ［关键词］ 脊髓性肌萎缩症；携带者筛查；ddPCR；HRM；PCR/CE
             ［中图分类号］ R446.7                    ［文献标志码］ A                      ［文章编号］ 1007⁃4368（2023）10⁃1402⁃05
              doi：10.7655/NYDXBNS20231011





                  脊髓性肌萎缩症（spinal muscular atrophy，SMA）          变性高效液相色谱法（denaturing high performance
              是一种常染色体隐性遗传病，是由于脊髓前角运动                            liquid chromatography，DHPLC） 、基质辅助激光
                                                                                            ［10］
              神经元变性导致的进行性近端肌肉萎缩和无力的                             解 析⁃电离飞行时间质谱法（matrix⁃assisted laser
              一组疾病 。其发病率为 1/6 000~1/10 000，人群携                  desorption ionization time⁃of⁃flight mass spectrometry，
                      ［1］
              带率为 1/40~1/50，在导致儿童死亡的常染色体遗                       MALDI⁃TOF） 、微滴数字PCR（droplet digital PCR，
                                                                            ［11］
                            ［2］
              传病中排名第 2 。SMA致病基因为运动神经元存                          ddPCR） ［12］ ，以 及 下 一 代 测 序 法（next generation
              活基因 1（survival motor neuron，SMN1），其纯合缺失           sequencing，NGS） 。MLPA是检测SMN基因拷贝数
                                                                               ［8］
              是引起 SMA 的主要原因 。SMN2 基因与 SMN1 高                    的金标准，但其耗材贵且检测周期长，导致MLPA不
                                    ［3］
                                                      ［4］
              度同源，作为修饰基因，影响疾病的严重程度 。通                           适合大规模携带者筛查            ［13］ 。qPCR 操作简单，成本
              常情况下，SMA的发生95%~98%是由SMN1基因第                       较低，是人群 SMA 筛查最常使用的方法之一，但由
              7 号外显子的纯合缺失导致，2%~5%是由 SMN1 基                      于 DNA 片段非特异性扩增，可能会出现假阳性结
              因点突变或部分缺失导致            ［5-6］ 。鉴于SMA人群携带           果，临床开展有一定的局限性 。
                                                                                          ［14］
              率高，病情严重和治疗费用昂贵，美国医学遗传学                                本研究对 516 例样本同时使用 MLPA、ddPCR、
              会建议对所有育龄夫妇进行SMA携带者筛查 。                            高分辨率熔解曲线（high⁃resolution melting，HRM）
                                                      ［7］
                  目前检测SMN基因拷贝数的方法较多，如多重                         与多重竞争性 PCR 联合毛细管电泳（PCR⁃based

              连接探针依赖扩增技术（multiplex ligation⁃dependent           capillary electrophoresis，PCR/CE）技术对 SMN 拷贝
                                     ［8］
              probe amplification，MLPA） 、实时定量聚合酶链反              数进行检测并对这些方法的性能进行比较。
                                                         ［9］
              应（quantitative polymerase chain reaction，qPCR） 、
                                                                1 对象和方法

             ［基金项目］ 江苏省妇幼保健协会科研课题（FYX202008）                    1.1  对象
              ∗                                                     收集 2020 年 3 月—2021 年 10 月在南京市妇幼
              通信作者（Corresponding author），E⁃mail：tanjx@njmu.edu.cn
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