Page 79 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第10期 孙瑞红，蒋 祝，邵彬彬，等. 三种脊髓性肌萎缩症携带者筛查方法的性能评估［J］.
2023年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（10）：1402-1406 ·1405 ·

PCR/CE 能够量化 SMN1 第 7 号和第 8 号外显子、 HRM 只能准确地分析出多达 2 拷贝。每个样品
SMN2第7号和第8号外显子的拷贝数。此外，MLPA、 的成本根据我们从国内供应商处获得的价格计
ddPCR和PCR/CE可以准确地检测出多达4拷贝，而 算（1 美元=6.9人民币）。

表6 4种SMN1和SMN2基因检测方法的特点比较
参数 MLPA ddPCR HRM PCR/CE
基因和外显子检测靶点 SMN1外显子7和8， SMN1外显子7 SMN1外显 SMN1外显子7和8，
SMN2外显子7和8 子7和8 SMN2外显子7和8
准确区分最大拷贝数（拷贝） 4 4 2 4
每个样本的成本（美元） 29.0 14.5 43.5 14.5
检测时间（h） 24.0 2.0 2.0 2.5
内参基因 IRF6 RPP30 CFTR β⁃球蛋白和β⁃肌动蛋白

析 SMN2 拷贝数有助于预测疾病的演变，并为遗传
3 讨 论
咨询提供依据。此外，据报道，因为 SMN1 和 SMN2
本研究纳入了516个样本，以MLPA 为金标准， 的同时缺失会导致胚胎死亡，SMN2 在所有 SMA 患
比较 ddPCR、HRM 和 PCR/CE 检测 SMN1 第 7 号、第 者中都被保留 ［23-24］ 。因此，SMN2 可以通过与 SMN1
8 号外显子拷贝数的特异度和灵敏度。在这 3 种方 同时扩增作为参考基因。在本研究中，除了 MLPA
法中，PCR/CE 似乎是最可靠的方法，它与 MLPA 在 之外，只有 PCR/CE 分析可以同时测定 SMN1 和
检测 SMN1 和 SMN2 的拷贝数方面表现出很好的一 SMN2的拷贝数，并与MLPA的结果表现出很好的一
致性。 致性。
SMN1 第 7 号第 8 号外显子纯合缺失约占 SMA 本研究存在如下局限性。首先，没有 0 拷贝
［15］
患者的95% 。然而，也有SMN1第8号外显子纯合 SMN1 的样本，无法评估这些方法在分析 0 拷贝
缺失，但第7号外显子未见异常的报道。Gambardella SMN1时的特异度和灵敏度。其次，这4种方法都不
等 ［16］ 报告了 2 例无亲缘关系的患者，由于 SMN1 第 能检测 SMN1 基因的点突变，而这一突变约占 SMA
8 号外显子纯合缺失而具有SMAⅡ型和Ⅲ型的典型 病例的 5%，导致携带者筛查中存在不可避免的残
表型。此外，1 例 10 月龄的 SMAⅠ型男婴表现为双 留风险。最后，这些方法都会将一小部分携带者
侧视神经萎缩，是由SMN1第8号外显子的孤立缺失 （约 4%）错误地归类为非携带者，这些携带者在同
引起 ［17］ 。在以前的研究中，约有 5%的中国孕妇携 一条染色体上有2个重复的SMN1拷贝，而在另一染
带SMN1第8号外显子的杂合性缺失，但有完整的第 色体上没有拷贝［2+0］。
7 号外显子 。因此，除了 SMN1 第 7 号外显子，在 综上所述，本研究通过比较 ddPCR、HRM 及
［9］
SMA 携带者筛查中包含SMN1第8号外显子也很重 PCR/CE 3 种检测方法在 SMA 携带者筛查中的优缺
要。在本研究中，ddPCR不包含针对SMN1第8号外 点，为临床开展携带者筛查项目的技术选择提供参
显子的特异性探针，这可能导致SMA携带者筛查中 考依据。

出现额外的残留风险。MLPA、HRM分析和PCR/CE ［参考文献］
在量化 SMN1 第 8 号外显子方面具有相对较高的
［1］ LUNN M R，WANG C H. Spinal muscular atrophy［J］.
特异度和灵敏度，因此是适合 SMA 携带者筛查的
Lancet，2008，371（9630）：2120-2133
方法。
［2］ HENDRICKSON B C，DONOHOE C，AKMAEV V R，et
SMN2 是 SMN1 的同源基因，两者仅有 5 个碱基
al. Differences in SMN1 allele frequencies among ethnic
不同 ［18-19］ 。第 7 号外显子中的 1 个 C⁃T 核苷酸转换
groups within North America［J］. J Med Genet，2009，46
导致大约 90%的 SMN2 转录本跳过该外显子，导致
（9）：641-644
快速降解而不能补偿SMN1的功能 ［20］ 。剩余10%的 ［3］ REILLY A，CHEHADE L，KOTHARY R. Curing SMA：
SMN2 转录本不足以弥补 SMN1 基因功能缺失。尽
are we there yet?［J］. Gene Ther，2023，30（1-2）：8-17
管如此，SMN2 拷贝数的增加一般与较温和的 SMA ［4］ MAILMAN M D，HEINZ J W，PAPP A C，et al. Molecular
临床表现有关 ［21-22］ 。因此，在SMA 携带者筛查中分 analysis of spinal muscular atrophy and modification of