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第43卷第11期 江婷婷，郭俊巧，王 越，等. 白芍总苷抑制NLRP3活化治疗干燥综合征小鼠的实验研究［J］.
2023年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（11）：1509-1514 ·1511 ·

样品 10 μL 进行凝胶电泳并转移至 PVDF 膜，5%脱 入 100 μg/mL TGP 同时连续加 LPS+ATP 进行刺
脂牛奶封闭1.5 h，加入相应的一抗（抗小鼠NLRP3、 激，方案同 LPS+ATP 组，LPS 刺激 4 h+ATP 刺激
ASC、Caspase⁃1 抗体），抗体均以 1∶1 000 的比例稀 40 min 后结束培养。按照 1.2.4 及 1.2.5 方法检测
释，摇床 4 ℃孵育过夜，次日用 TBST 洗 3 次，每次 细胞中 NLRP3、ASC 和 Caspase⁃1 的 mRNA 和蛋
10 min，加入辣根过氧化物酶（horseradish peroxi⁃ 白的表达。
dase，HRP）标记的二抗，室温孵育1 h，TBST洗涤后加 1.3 统计学方法
发光液于凝胶成像仪曝光，用Image J软件进行分析。 采用 Graph Pad Prism 9.0 软件进行作图和数据
1.2.6 培养的脾脏细胞NLRP3炎症小体检测 分析，结果用均值±标准差（x ± s）表示，所有实验均
无菌条件下分离小鼠脾脏细胞，裂解红细胞 独立重复3次。两组之间比较采用t检验，多组间差
后，将脾脏细胞以 2×10 个/孔的密度接种在 6 孔板 异比较采用 One⁃way ANOVA 分析，P < 0.05 为差异
6
中，采用无血清RPMI 1640培养基37 ℃、5% CO2、饱 有统计学意义。
和湿度下培养。根据文献报道 ［15-16］ ，采用脂多糖
2 结 果
（lipopolysaccharide，LPS）和三磷酸腺苷（adenosine
triphosphate，ATP）刺激细胞，按照处理干预因素将 2.1 TGP治疗后SS小鼠唾液流量增加

脾脏细胞分为3组：对照组、LPS+ATP 处理组、LPS+ TGP 灌胃 1 个月后，两组小鼠之间的体重没有
ATP+TGP处理组。对照组不加任何药物及刺激剂； 明显差异（P＞0.05，图 1A）。TGP 组小鼠的唾液流
LPS+ATP 组加入 1 μg/mL LPS 刺激细胞 4 h 后用 量较PBS组显著增加（P＜0.05，图1B）。TGP组颌下
5 mmol/L ATP 刺激 40 min；LPS+ATP+TGP 组加 腺重量较PBS组明显下降（P＜0.05，图1C）。

A B C
30 250 0.15 *
*
200
（ g ） （ μL ） （ g ） 0.10
小鼠体重 20 唾液流量 150 颌下腺重量
100
10
50 0.05
0 0 0
对照组 TGP组 对照组 TGP组 对照组 TGP组
A：两组体重变化；B：两组唾液流量；C：两组颌下腺重量。两组比较，P < 0.05（n=5）。
*
图1 TGP降低小鼠颌下腺重量同时增加唾液流量但对体重无显著影响
Figure 1 TGP decreased the weight of submandibular gland and increased saliva flow in mice，but had no significant effect
on body weight of mice

2.2 TGP治疗后颌下腺中淋巴浸润减少 ×40 ×100
对照组小鼠颌下腺的血管和导管周围可见多
个淋巴细胞浸润灶，而TGP组小鼠颌下淋巴细胞浸
润显著减少（图2）。 对照组
2.3 TGP抑制小鼠体内脾脏细胞NLRP3炎症体活化
与对照组比较，TGP组小鼠脾脏组织中NLRP3、
ASC和Caspase⁃1 mRNA表达明显降低，差异有统计
学意义（P＜0.05，图 3A~C）。Western blot 检测蛋白
TGP组
表达水平，结果显示 TGP 治疗后小鼠脾脏组织中
NLRP3、ASC 和 Caspase⁃1 蛋白表达也显著低于 PBS
处理组（P＜0.05，图3D、E）。

2.4 TGP体外抑制脾脏细胞NLRP3炎症体活化 图2 TGP减轻颌下腺淋巴细胞浸润
与对照组相比，LPS+ATP组脾脏细胞中NLRP3、 Figure 2 TGP reduces lymphocyte infiltration in subman⁃
ASC及Caspase⁃1的mRNA表达量显著增加，差异有 dibular gland