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第43卷第11期 赵唐明，王 娥，张琳琳，等. tRF⁃011690对阿霉素诱导的足细胞自噬的影响［J］.
2023年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（11）：1515-1519 ·1517 ·

tRF⁃011690过表达成功（P < 0.05，图1A）。 图1C、D）。
RT⁃qPCR 结果显示，与 Control 组比较，ADR 组 2.2 阻断mTOR信号通路对tRF⁃011690及足细胞
LC3 和 p62 mRNA 表达量明显上升（P <0.05），与 自噬的影响
ADR+tRF⁃ 011690 NC 组相比，ADR+tRF⁃ 011690 RT⁃qPCR 结果表明，与 Control 组相比，ADR 组
mimic 组 LC3 和 p62 mRNA 表达量减少（P <0.05，图 mTOR 表达水平上升、tRF⁃011690 表达水平下降
1B）。Western blot结果表明，与Control组比较，ADR （P < 0.05），与 ADR 组 相 比 ，ADR + Rapamycin 组
组的LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白表达量明显上升（P < 0.05）， mTOR 表达水平下降、tRF⁃011690 表达水平升高

与 ADR+tRF⁃011690 NC 组相比，ADR+tRF⁃011690 （P < 0.05，图 2A、B）。Western blot 结果表明，与
mimic组LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白表达量减少（P < 0.05， Control组相比，ADR组p⁃mTOR、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋

A #△ B Control组 C D Control组
10 000 一一 一一 一一 ADR组 mimic组 NC组 一一 一一 一一 ADR组
tRF⁃011690相对表达量 4 000 2.0 一一 一一 一一 1.5 * * △ * * # Control组 ADR+tRF⁃011690 ADR+tRF⁃011690 2.0 一一 一一 一一 1.5 * # * 一一 一一 一一 一一 * # * 一一 一一
8 000
ADR+tRF⁃011690 NC组
ADR+tRF⁃011690 mimic组
6 000
ADR+tRF⁃011690 mimic组
ADR+tRF⁃011690 NC组
2 000
1.5
#
1.0
0.5
0 ADR组 * * mRNA相对表达水平 1.0 一一 一一 一一 一一 一一 一一 △ 一一 一一 一一 一一 一一 一一 LC3 Ⅰ ADR组 16 kDa 蛋白相对表达量 1.0 △ 一一 一一 一一 一一 一一 一一 △ 一一 一一 一一 一一 一一 一一 一一 一一
ADR+tRF⁃011690 NC组 0 LC3 一一 一一 一一 一一 一一 一一 一一 一一 p62 β⁃actin 62 kDa 0 LC3Ⅱ/Ⅰ 一一 一一 一一 一一 一一 一一 一一 一一 p62
Control组
ADR+tRF⁃011690 mimic组
0.5
0.5
LC3
Ⅱ
14 kDa
p62
43 kDa
A：各组tRF⁃011690的相对表达量；B：各组LC3和p62 mRNA的相对表达量；C、D：Westem blot 检测各组LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的相对表
达量（C）及定量分析（D）。与Control组相比，P＜0.05；与ADR组相比，P＜0.05；与ADR+tRF⁃011690 NC组相比，P＜0.05（n=3）。
*
#
△
图1 过表达tRF⁃011690对足细胞自噬的影响
白表达量增加（P < 0.05），与ADR组相比，ADR+Ra⁃ tRNA 的随机降解产物，它在不同状态的干细胞中
pamycin组p⁃mTOR、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白表达量降低 差异表达，分别在转录、转录后和表观遗传水平调
（P < 0.05，图2C~F）。 控基因表达，在细胞周期、氧化应激、凋亡、自噬等
生物学过程中发挥重要调节作用 ［16-18］ 。本课题组前
3 讨 论
期通过高通量测序发现，正常足细胞与ADR造成的
CKD 是由多种原因引起的慢性肾脏结构和功 损伤足细胞之间存在许多差异表达的 tRF，选取低
能障碍，其病理过程十分复杂，涉及多种细胞因子 表达改变最为显著的 tRF⁃011690 进行后续功能和
和信号通路。目前CKD治疗手段有限，只能一定程 机制研究。课题组前期研究 ADR 诱导肾病小鼠模
度上延缓疾病进程，因此寻找特异且有效的治疗靶 型，证明ADR能够诱导足细胞凋亡 ［19］ 。自噬流是一
点迫在眉睫。 个由多个步骤组成的动态过程，自噬流阻滞时 LC3
足细胞作为肾脏最重要的固有细胞之一，是肾 Ⅱ/Ⅰ和 p62 可能同时升高 ［20-21］ 。本研究发现 ADR
小球滤过屏障的重要组成部分，可以阻止蛋白从尿 组 LC3Ⅱ/Ⅰ和 p62 蛋白表达量均明显上升，这可能
液丢失，对维持肾脏结构和功能的稳定具有重要意 与实验过程中检测自噬标志蛋白的时间密切相关，
义 ［13-14］ 。研究表明足细胞功能失调与自噬关系密 后续研究可以设置多个时间节点对LC3Ⅱ/Ⅰ和p62
切，足细胞自噬在一定程度上会造成足细胞数量 进行检测，进一步完善研究结果。本研究 Western
减少，而足细胞数量减少是预测肾脏疾病进展的 blot检测ADR组LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白表达量均明显
重要指标 ［15］ ，自噬失调会导致肾脏疾病进展产生 上升，并且在 ADR 诱导的足细胞损伤模型中，细胞
大量蛋白尿。 自噬水平升高，tRF⁃011690 表达量下降。进一步在

tRF 作为新型非编码 RNA，是来自成熟 tRNA 足细胞中过表达 tRF⁃011690，结果显示与 ADR 组
或前体 tRNA 的衍生片段，研究表明 tRF 并不是 及 ADR+tRF⁃011690 NC 组相比，ADR+tRF⁃011690