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第43卷第3期 王一凡，谢金玉，陈迎玉，等. STK25在星形胶质细胞活化和EAE小鼠病变进程中的作用［J］.
2023年3月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（3）：311-318 ·315 ·

STK25 的表达与炎性因子及趋化因子生成的关系， 细胞炎性因子与趋化因子的转录水平显著升高（图
取新生乳鼠体外分离培养原代星形胶质细胞，用 4C、D），表明敲减 STK25 上调了星形胶质细胞中炎
IFN⁃γ诱导其活化。Western blot与Real⁃time PCR结 性因子与趋化因子的生成。
果显示，IFN⁃γ刺激6 h后，STK25蛋白表达水平显著 2.5 敲减STK25加速了EAE小鼠的疾病进程
降低，促炎因子TNF⁃α及趋化因子IP⁃10的mRNA水 前期研究已经证实，重组慢病毒悬液经尾静脉
平明显升高（图 3）。结果表明，病理条件下活化的 注射后，可以透过血脑屏障到达小鼠的中枢神经系
［9］
星形胶质细胞炎性因子的生成增加，其可能与 统 。为了证实质粒干扰的有效性，将小鼠分为LV⁃
STK25的表达降低有关。 STK25⁃shRNA 组和 LV⁃ctrl 组，分别经尾静脉注射

2.4 敲减 STK25 增加了星形胶质细胞炎性因子与 STK25 敲减与对照慢病毒悬液。Western blot 结果
趋化因子的生成 证实，LV⁃STK25⁃shRNA 组小鼠脊髓 STK25 的表达
为了进一步验证 STK25 对星形胶质细胞炎性 水平显著降低（图 5A、B）。为了探究敲减 STK25 对
因子生成的影响，首先构建特异性靶向星形胶质细 EAE小鼠疾病进程的影响，本研究将特异性敲减星
胞的STK25敲减慢病毒载体，转染小鼠原代星形胶 形胶质细胞 STK25 与对照的慢病毒悬液经尾静脉
质细胞，验证STK25的表达，STK25⁃shRNA⁃3的敲减 注射入小鼠体内，7 d后用MOG35⁃55诱导小鼠EAE 模
效率最高，选择它进行后续实验（图 4A、B）。之后， 型，采用双盲法每日评分并记录小鼠发病情况。与
包装慢病毒悬液，命名为LV⁃STK25⁃shRNA，对照组 LV⁃ctrl 组比较，LV⁃STK25⁃shRNA 组 EAE 小鼠发病
为LV⁃ctrl，分别感染小鼠原代星形胶质细胞72 h后， 时间提前，临床神经功能评分加重（图 5C）。Real⁃
用IFN⁃γ诱导星形胶质细胞活化。Real⁃time PCR结 time PCR结果显示，敲减STK25后，EAE小鼠脊髓组
果显示，敲减 STK25 后，活化的小鼠原代星形胶质 织中炎性因子 TNF⁃α与趋化因子 IP⁃10 的转录水平

A B C D
IFN⁃γ（20 ng/mL） 1.5 * 300 *** 3 ***
STK25蛋白相对表达量
0 h 3 h 6 h 12 h *
STK25 48 kDa 1.0 mRNA相对表达量 200 *** mRNA相对表达量 2 * **
36 kDa ***
GAPDH 0.5 100 1

0
0 h 3 h 6 h 12 h IP⁃10 0 0 h 3 h 6 h 12 h TNF⁃α 0 0 h 3 h 6 h 12 h
*
A、B：Western blot检测（A）及定量分析（B）IFN⁃γ诱导原代星形胶质细胞活化后第0 h、3 h、6 h、12 h的STK25表达水平，两组比较，P＜0.05
（n=3）；C、D：Real⁃time PCR检测及定量分析IFN⁃γ诱导原代星形胶质细胞活化后第0 h、3 h、6 h、12 h的IP⁃10（C）、TNF⁃α（D）转录水平，两组比
较，P＜0.05，P < 0.01， P＜0.001（n=3）。
**
***
*
图3 IFN⁃γ诱导原代星形胶质细胞活化后STK25与炎性因子、趋化因子的表达变化
Figure 3 Changes of expression of STK25，inflammatory cytokine and chemokine in primary astrocytes activated by IFN⁃γ
STK25⁃shRNA⁃3组
A B 1.5 * C 150 *** D 8 ***
STK25⁃shRNA⁃1组
Ctrl⁃shRNA组 STK25⁃shRNA⁃2组 1.0 mRNA相对表达量 100 mRNA相对表达量 6

STK25 48 kDa STK25蛋白相对表达量 0.5 50 4
GAPDH 36 kDa 0 IP⁃10 0 TNF⁃α 2 0

Ctrl⁃shRNA组 STK25⁃shRNA⁃3组 LV⁃ctrl组 LV⁃ctrl组
STK25⁃shRNA⁃1组
STK25⁃shRNA⁃2组
PBS IFN⁃γ PBS IFN⁃γ
PBS IFN⁃γ PBS IFN⁃γ
LV⁃STK25⁃shRNA组
LV⁃STK25⁃shRNA组
A：Western blot确认特异性靶向星形胶质细胞STK25敲减慢病毒载体成功构建；B：各组STK25蛋白表达的定量分析验证STK25的敲减效
率，两组比较，P＜0.05（n=3）；C、D：Real⁃time PCR检测LV⁃ctrl组与LV⁃STK25⁃shRNA组活化的原代星形胶质细胞中IP⁃10（C）、TNF⁃α（D）表达
*
水平，两组比较， P <0.001（n=3）。
***
图4 敲减STK25促进了原代星形胶质细胞炎性因子与趋化因子的生成
Figure 4 Knock⁃down of STK25 promotes the production of inflammatory cytokine and chemokine in primary astrocytes