Page 67 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第4期 段伟豪，俞学成，吴璟斌，等. miR⁃27b⁃3p通过靶向SSRP1调控骨肉瘤细胞的生长［J］.
2023年4月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（04）：502⁃509 ·505 ·

2.2 miR⁃27b⁃3p 过表达抑制骨肉瘤细胞的增殖并 CCK⁃8 实验以及集落形成实验结果显示，与对照
促进凋亡 组相比，miR⁃27b⁃3p 过表达后，骨肉瘤细胞增殖
为了评估miR⁃27b⁃3p在骨肉瘤发生发展中的生 能力明显减弱（图 2B、C）。流式细胞术也获得了
物学功能，在骨肉瘤细胞株中过表达 miR⁃27b⁃3p， 相同的结果，miR⁃27b⁃3p 过表达后，骨肉瘤细胞
转染48 h后采用RT⁃qPCR检测过表达效率，结果显 的凋亡率明显高于对照组（图 2D）。以上结果表
示，与对照组相比，转染 miR⁃27b⁃3p mimics 的骨肉 明，miR⁃27b⁃3p 过表达会抑制骨肉瘤的增殖并促进
瘤细胞中 miR⁃27b⁃3p 的表达显著升高（图 2A）。 凋亡。

A B 对照组 C 300
8 6 * 2.0 mir⁃27b⁃3p mimic组 对照组
miR⁃27b⁃3p相对表达量 4 2 mn ） （ 450 D 1.5 ** （ 个 ） 集落数目 200 ***

1.0
100
**
*
0 0.5 0 0 24 48 ** 96 120 miR⁃27b⁃3p mimic组 0
miR⁃27b⁃3p mimic组 时间（h） miR⁃27b⁃3p mimic组
对照组
对照组
72
D 对照组 miR⁃27b⁃3p mimic组 25
Q1 Q2 Q1 Q2 **
（ % ）
10 5 10 5 20
1.31% 9.11% 1.28% 13.30%
细胞凋亡率 10
10 4 10 4 15
PI 10 3 PI 10 3
5
10 2 10 2
0
Q4 Q3 Q4 Q3
0 86.60% 2.95% 0 79.70% 5.75% 对照组
0 10 2 10 3 10 4 10 5 0 10 2 10 3 10 4 10 5 miR⁃27b⁃3p mimic组
FITC FITC
A：RT⁃qPCR检测miR⁃27b⁃3p的过表达效率；B：CCK⁃8测定miR⁃27b⁃3p过表达后骨肉瘤细胞增殖能力；C：集落形成实验检测miR⁃27b⁃3p
过表达后骨肉瘤细胞集落形成能力的变化；D：流式细胞术分析 miR⁃27b⁃3p 过表达后骨肉瘤细胞凋亡率的变化。与对照组相比，P < 0.05，
*
P < 0.01， P < 0.001（n=3）。
** ***
图2 miR⁃27b⁃3p过表达显著抑制骨肉瘤细胞的生长
Figure 2 Overexpression of miR⁃27b⁃3p significantly suppressed the growth of OS cells

2.3 SSRP1是miR⁃27b⁃3p的直接靶点 是miR⁃27b⁃3p的靶基因（图3C）。
使用在线数据库 TargetScan、miRDB、Starbase 2.4 干扰SSRP1抑制骨肉瘤细胞的生长
预测 miR⁃27b⁃3p 靶基因，以进一步探究 miR⁃27b⁃3p 为了进一步研究 SSRP1 在骨肉瘤细胞生长中
影响骨肉瘤细胞生长的潜在机制。SSRP1在 3 个数据 是否发挥作用，使用特异性的 si⁃SSRP1 干扰 SSRP1
库中被同时预测为 miR⁃27b⁃3p 的靶基因并获得预 的表达。首先，通过Western blot 实验验证si⁃SSRP1
测的结合位点（图 3A）。使用双荧光素酶报告基 的干扰效率，结果显示，SSRP1的表达在si⁃SSRP1⁃1
因实验验证 miR⁃27b⁃3p 是否直接靶向 SSRP1，结果 组以及si⁃SSRP1⁃2组显著下调（图4A）。随后，CCK⁃8
显示，miR⁃27b⁃3p mimics 与 SSRP1⁃WT 共转染的相 实验以及集落形成实验证实，干扰 SSRP1 后，显著
对荧光活性显著降低，而 SSRP1⁃Mut 组未见明显变 抑制了骨肉瘤细胞的增殖能力（图 4B、C）。流式细

化（P < 0.05，图 3B）。这表明 SSRP1 是 miR⁃27b⁃3p 胞术结果显示，干扰SSRP1促进了骨肉瘤细胞的凋
的直接靶点。与对照组相比，miR⁃27b⁃3p 过表达组 亡（图 4D）。以上结果证实了 SSRP1 在骨肉瘤细胞
中的 SSRP1 的表达量明显下调，证实了 SSRP1的表 生长中发挥重要作用，干扰SSRP1抑制骨肉瘤的增

达受 miR⁃27b⁃3p 直接调控。以上结果表明，SSRP1 殖并促进其凋亡。