Page 25 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第5期 付 鑫，吴 茗，陈 献，等. mTOR信号通路在调控卵巢癌CD4 Treg糖代谢中的作用［J］.
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2023年5月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（5）：604-610 ·607 ·

两组间的对比在正态性检验之后用独立样本 t 检 核细胞后，应用流式细胞术检测其mTOR CD4 Treg
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验。P < 0.05为差异有统计学意义。 的百分比（图 1），结果显示 OC 外周血中 mTOR +
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CD4 Treg 比例显著高于 HC［（77.4 ± 8.12）% vs.
2 结 果
（64.19 ± 9.7）%，P < 0.01］，OC组与BOT组相比差异
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2.1 卵巢癌患者外周血中 mTOR 的 CD4 Treg 百分 无统计学意义［（77.4 ± 8.12）% vs.（74.6 ± 9.25）%，
比升高 P > 0.05］，表明 OC 患者外周血中 mTOR 的 CD4 +
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OC、BOT和HC组外周血，分离得到外周血单个 Treg比例升高。
A 空白 HC（64.1%） BOT（74.1%） OC（84.0%）
40 50
400
30
MTOR subset MTOR subset MTOR subset
30 64.1 74.1 40 84.0
300
（ % ） 20 20 30
百分比 200 20
100 10 10
10
0 0 0 0
10 -2 10 0 10 2 10 4 10 6 10 0 10 2 10 4 10 6 10 0 10 2 10 4 10 6 10 0 10 2 10 4 10 6
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CD4 CD25 CA127 mTOR +
B
120 **
（ % ） 100 *
Treg 80
60
mTOR + CD4 + 40
20
0
HC BOT OC
A：流式检测代表图；B：mTOR 的CD4 Treg百分比统计图。两组比较，P < 0.05，P < 0.01（n=10）。
*
+
**
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图1 卵巢癌患者、卵巢良性肿瘤患者和健康对照者外周血中mTOR CD4 Treg 比例
Figure 1 The percentages of mTOR CD4 Treg in peripheral blood of OC，BOT and HC
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2.2 卵巢癌细胞的生长促进人外周血CD4 Treg中 2.3 阻断SKOV3生长环境中CD4 Treg的mTOR信
mTOR的表达 号后其糖摄取和糖酵解水平下降
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为了进一步研究 mTOR 信号通路在 CD4 Treg 使用mTOR分子抑制剂雷帕霉素阻断与SKOV3
中的作用，建立CD4 Treg与SKOV3 共培养体系，将 共培养后CD4 Treg的mTOR信号后，其糖代谢特征
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分选扩增后的CD4 Treg与卵巢癌细胞SKOV3共培 变化情况如图3所示。与对照组相比，雷帕霉素处理
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养3 d，流式分选检测mTOR 的CD4 Treg百分比，结 组 CD4 Treg 的葡萄糖摄取（OD 值：3.31±0.19 vs.
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果显示CD4 Treg 与SKOV3共培养后mTOR 细胞百 3.04±0.21，P＜0.01；2⁃脱氧葡萄糖换算值：193.49±
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分比明显升高（P < 0.05，图 2A、B）；RT⁃PCR 检测其 13.28 vs. 174.05±14.58，P＜0.01）和糖酵解（OD 值：
mTOR 信 号 通 路 相 关 基 因 的 表 达 水 平 ，发 现除 1.82±0.07 vs. 0.39±0.13，P＜0.001；L⁃乳酸相对值：
TSC2 外，SKOV3 共培养组 CD4 Treg 的 mTOR 信号 21.97±0.87 vs. 4.85±1.54，P＜0.001）水平降低，差异
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相关基因的表达水平均高于CD4 Treg单独培养组 有统计学意义，提示mTOR 信号与卵巢癌患者CD4 +
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（图 3C）；Western blot 检测其 mTOR 通路相关蛋白 Treg的糖代谢过程密切相关。
表达水平，SKOV3 共培养组 CD4 Treg 的 mTOR 信 2.4 阻断SKOV3生长环境中CD4 Treg的mTOR信
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号 通 路 相 关 蛋 白（p⁃mTOR ，p⁃P70S6K、p⁃4E⁃ 号后其糖代谢相关基因和蛋白水平下调
BP1）的表达水平高于 CD4 Treg 单独培养组（图 接下来，使用雷帕霉素处理与SKOV3共培养后
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2D）。以上结果提示卵巢癌细胞的生长会促进人 的 CD4 Treg，RT⁃PCR 和 Western blot 检测其糖代谢
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外周血 CD4 Treg 中 mTOR 的表达和下游信号通路 相关基因和蛋白的表达水平，雷帕霉素处理组 CD4 +
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的活化。 Treg 糖代谢相关基因 Glut1、Glut3、HIF⁃1α、TPI、