Page 35 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第6期 毋柯蓉，郭 兴. Drp1缺失通过ABCB10激活线粒体未折叠蛋白反应［J］.
2023年6月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（6）：772-779 ·777 ·

A 2.5 *** B 1.5 ** A pLKO sh⁃Drp1 sh⁃ABCB10 D⁃sh
mRNA相对表达量 2.0 mRNA相对表达量 1.0 CHOP 29 kDa

1.5

Drp1
ABCB10 1.0 ABCB10 0.5 ABCB10 80 kDa
0.5
60 kDa
0 0
pLKO sh⁃Drp1 DMSO Mdivi⁃1
β⁃actin 42 kDa
A：在 sh⁃Drp1 组及对照 pLKO 组细胞中检测 ABCB10 mRNA 水
B
平；B：在 Mdivi⁃1 组及对照 DMSO 组细胞中检测 ABCB10 mRNA 水 3 *
* *
平。两组比较，P < 0.01， P < 0.001（n=4）。
***
**
图 5 敲低 Drp1 或 Mdivi⁃1 处理对 ABCB10 mRNA 水平的
影响 2
Figure 5 Effect of Drp1 knockdown or Mdivi ⁃ 1 on GHOP蛋白相对表达量
ABCB10 mRNA levels 1

mtUPR，对 MEF 细胞进行 Drp1 和 ABCB10 双敲处理
（D⁃sh 组）。结果显示，sh⁃Drp1 组 CHOP 蛋白较
pLKO 组显著上升；sh⁃ABCB10、D⁃sh 组 CHOP 蛋白 0 pLKO sh⁃Drp1 D⁃sh
水平较 sh⁃Drp1 组显著下调（图 6）。表明 Drp1 下调 sh⁃ABCB10
依赖ABCB10引起mtUPR。 A：Western blot 检测各组细胞中CHOP 蛋白表达；B：各组CHOP
*
2.7 Drp1 和 ABCB10 双敲对细胞存活和线粒体功 蛋白表达的半定量分析。两组比较，P < 0.05（n=3）。
图6 Drp1和ABCB10双敲对mtUPR的影响
能的影响 Figure 6 The effect of Drp1 and ABCB10 double knock⁃
为观察 Drp1 和 ABCB10 双敲处理后 MEF 细胞
ing down on mtUPR
存活和线粒体功能的影响，检测培养液中 LDH 含
量，并用 mitoSOX 指示剂和 TMRM 指示剂染色检测
3 讨 论
相应功能指标。结果显示，sh⁃Drp1 组细胞 LDH 释
放量较 pLKO组增加，mitoSOX含量升高，MMP降低。 mtUPR 通过感知线粒体蛋白质的状态，依赖伴

D⁃sh组与sh⁃Drp1相比，细胞LDH释放量降低，mito⁃ 侣蛋白促进未折叠蛋白质折叠，增强错误折叠蛋白
SOX含量降低，MMP升高，且3项指标与pLKO组差 质降解，防止蛋白质聚集，是线粒体⁃核通讯的重要
异均无统计学意义（图 7）。结果提示 sh⁃Drp1 可引 方式。为研究线粒体断裂抑制是否会引起mtUPR，
起线粒体功能受损及细胞死亡增加，D⁃sh组可以挽 本研究通过敲除或敲低 Drp1 或使用 Drp1 抑制剂
救sh⁃Drp1引起的线粒体功能障碍及细胞死亡。 Mdivi⁃1和P110处理下调线粒体分裂关键蛋白Drp1

A 2.0 ** *** B 1.5 * ** C 1.5 *
（ 与对照组相比 ） 1.5 mitoSOX相对值 1.0 MMP相对值 1.0 *

1.0
LDH释放量 0.5 0.5 0.5

0 0 0
pLKO sh⁃Drp1 D⁃sh pLKO sh⁃Drp1 D⁃sh pLKO sh⁃Drp1 D⁃sh

检测各组细胞中LDH（A）、mitoSOX（B）、MMP（C）水平。两组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001（n=3）。
***
*
**
图7 Drp1和ABCB10双敲对细胞存活和线粒体功能的影响
Figure 7 The effect of Drp1 and ABCB10 double knocking down on cell survival and mitochondrial function