Page 40 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第6期
·782 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年6月

Vazyme公司，美国），将1 μg总RNA逆转录成cDNA。 1.3 统计学方法
使用针对外显子 V（TANGO2⁃Q⁃F：5′⁃GTCCTTGT⁃ 统计分析采用SPSS 23.0进行计算，统计图采用
CACTCAGCTCCT⁃3′）和 VI（TANGO2⁃Q⁃R：5′⁃CAT⁃ Origin 2018 软件制作。数据以均值±标准差（x ± s）
GCTCCGTTCAGTGAAGG⁃3′）的引物，使用优化的 表示。使用成对t检验进行两组数据比较。P < 0.05
PCR 方案（95 ℃ 5 min 预变性；然后 95 ℃ 30 s，58 ℃ 为差异有统计学意义。
退火 30 s，72 ℃延伸 30 s，45 个循环）进行实时荧光
2 结 果
定量PCR。使用β⁃actin作为内参引物（β⁃actin⁃F：5′⁃
CCTCTATGCCAACACAGTGC⁃3′；β⁃actin⁃R：5′⁃CCT⁃ 2.1 mRNA水平上证实TANGO2敲除小鼠构建成功
GCTTGCTGATCCACATC⁃3′）。PCR过程的SYBR荧 通过PCR实验检测小鼠的基因型，WT小鼠只有

-/-
TM
光强度通过 QuantStudio 5 实时 PCR 系统（Applied 1条487 bp的条带，TANGO2 小鼠只有1条328 bp的
Biosystems公司，美国）进行检测。使用ΔΔCt分析方 条带，这两条条带在 TANGO2 小鼠中都能够显现
+/-
法计算mRNA相对含量。 （图2）。
1.2.3 苏木精⁃伊红（HE）染色 为了检验构建的 TANGO2 敲除小鼠模型的敲
将新生和 6 月龄的 WT 和 TANGO2 小鼠的心 除效率，进行了WT和TANGO2 小鼠心脏和大脑组
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-/-
脏和大脑组织固定在 4%多聚甲醛的 PBS 溶液中， 织的实时荧光定量PCR。结果表明，TANGO2在WT
4 ℃过夜。PBS 洗涤3次后，将固定好的样品进行脱 小鼠的心脏和大脑中都有表达，而在同窝出生的
水处理，并包埋在石蜡中。在石蜡切片机上将组织切 TANGO2 小鼠的相应组织中没有观察到 TANGO2
-/-
成8 μm厚的切片，并用苏木精和伊红染色。最后在 mRNA的表达。这证明了TANGO2敲除小鼠模型构
体式镜（SZX10，Olympus公司，日本）上拍摄切片。 建成功（图3）。

1 63 64 4 60 2 62 5 61 1 63 64 4 60 2 62 5 61
487 bp—
—328 bp

1 号、61 号、62 号小鼠的基因型是 TANGO2 ，2 号、4 号、5 号、60 号、64 号小鼠的基因型是 TANGO2 ，63 号小鼠的基因型是 TANGO2 。
+/-
-/-
+/+
图2 小鼠基因型鉴定
Figure 2 Mouse genotype identification
-/-
A *** B *** 小鼠进行表型观察。结果显示 TANGO2 小鼠能
mRNA相对表达量 1.2 mRNA相对表达量 1.2 TANGO2 出生小鼠比率分别为 25%、51%和 24%，
够以预期的孟德尔比例出生，WT、TANGO2 和
+/-
-/-
0.8
0.8
且不存在明显的表型异常，说明敲除 TANGO2 对小
-/-
TANGO2 0.4 TANGO2 0.4 鼠胚胎发育没有明显影响。出生后的 TANGO2
小鼠发育正常，未出现发育迟缓的现象，能够正常
生活和繁殖，没有明显的表型异常或行为异常。
0 0
-/-
WT TANGO2 -/- WT TANGO2 -/- TANGO2 小鼠的生存率与 WT 小鼠相比没有表现
出任何具有统计学意义的差异（图4）。
A：心脏中TANGO2 mRNA表达水平；B：大脑中TANGO2 mRNA
表达水平。两组比较， P＜0.001（n=4）。 2.3 TANGO2敲除小鼠心脏和大脑表型正常
***
-/-
图3 WT和TANGO2 小鼠中TANGO2 mRNA的表达水平 为了探究 TANGO2 小鼠的心脏是否存在结构
-/-
Figure 3 The mRNA expression levels of TANGO2 in WT 异常，取新生和成年6 月龄的 WT 和 TANGO2 小
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and TANGO2 mice
-/-
鼠的心脏进行表型观察。结果显示，新生和成年
-/-
2.2 TANGO2敲除小鼠无明显表型异常 6 月龄的 TANGO2 小鼠的心脏与 WT 相比不存在
TANGO2 小鼠能够正常生存和繁育后代，让适 明显的差异，TANGO2 小鼠的心脏结构正常，没有
+/-
-/-
+/-
龄的 TANGO2 雌、雄小鼠交配，以产生 TANGO2 -/- 圆锥动脉干等异常结构（图5）。