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第43卷第7期
               ·936 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2023年7月


              并排除其他可能引起高雄激素和排卵异常的疾病                             VD缺乏饲料、VD缺乏饲料喂养。饲料配制：标准饲
              即可诊断 PCOS。健康对照组纳入标准：①年龄                           料按AIN⁃93 标准配方生产，含VD 1 000 U/kg 体重，
              20~40岁；②超声检查显示正常；③实验室三大常规                         0.5%钙，0.3%磷；VD 缺乏饲料：几乎不含 VD，含
              检测显示正常。排除标准：①因其他疾病导致雄激                            2.0%钙，1.2%磷。
              素升高；②近3个月内服用过避孕药物、二甲双胍或                                CTR组：饲喂符合美国AIN93标准的对照饲料，
              其他影响激素代谢的药物；③处于妊娠期或哺乳                             饲喂 6 周后每日上午予 10 mL/（kg·d）0.9% NaCl 溶
              期；④伴甲状腺功能、肝肾功能异常或高血压、糖                            液灌胃，连续21 d后收样。
              尿病等慢性疾病需长期服药；⑤伴有卵巢其他相                                  PCOS 组：饲喂符合美国 AIN93 标准的对照饲
              关性疾病；⑥恶性肿瘤；⑦近3个月内服用影响体                            料，饲喂6周后每日上午予来曲唑 1 mg/（kg·d）溶于
              内VD及钙、磷等微量元素代谢的药物。                                0.9% NaCl溶液中（Let⁃0.9%NaCl）灌胃，连续21 d后
              1.2.2  实验室指标检查                                    收样 。
                                                                    ［7］
                  在南京医科大学附属逸夫医院检验科收集                                 VD 组：饲喂VD缺乏饲料，饲喂6周后每日上午
                                                                       -
              患者检查后剩余的血样，在中心实验室离心收集                             予 10 mL/（kg·d）0.9% NaCl 溶液灌胃，连续 21 d 后

              血清后送杭州佰辰医学检验所，质谱法检测 PCOS                          收样。
              组患者和对照组正常健康女性的血清 25（OH）D 水                             VD +PCOS 组：饲喂 VD 缺乏饲料，饲喂 6 周后
                                                                       -
              平，其余指标均在南京医科大学附属逸夫医院检                             每日上午予1 mg/（kg·d）Let⁃0.9%NaCl溶液灌胃，连
              验科检测。血样收集时间：月经期第 2~5 天，闭                          续21 d后收样。
              经或停经患者于首次就诊时，清晨空腹 8 h 后抽                               喂养时需每隔 1 d 更换 1 次鼠粮和饮水。笼
              取静脉血。检测指标包括性激素组合：LH、FSH、                          子上不应含有超过 48 h 的饲料，超期的鼠粮及时
              雌二醇（estradiol，E2）、孕酮（progesterone，P）、睾酮           丢弃  ［8-9］ 。
             （testosterone，TT）、性激素结合球蛋白（sex hormone             1.2.4  动情周期测定
              binding globulin，SHBG）、泌乳素（prolactin，PRL）；             在饲喂第 6 周、第 9 周起于每天上午 09：00—
              代谢指标：空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）、空            10：00使用10~20 μL生理盐水对小鼠的阴道进行冲
              腹 胰 岛 素（fasting insulin，FINS）、总 胆 固 醇（total       洗并收集阴道上皮细胞，共持续8 d。将阴道上皮细
              cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度         胞涂抹在防脱载玻片上用95％乙醇固定10 min，使
              脂蛋白胆固醇（high⁃density lipoprotein cholesterol，      用 0.1％甲苯胺蓝染色 3 min。待玻片自然风干后，
              HDL⁃C）、低密度脂蛋白胆固醇（low⁃density lipopro⁃             使用普通光学显微镜进行读片。根据阴道上皮细
              tein cholesterol，LDL⁃C）、促甲状腺生成素（thyroid           胞种类（是否角质化）、白细胞占比（主要为淋巴细
              stimulating hormone，TSH）。由检测结果计算 LH/              胞）评估小鼠所处的动情周期阶段。
              FSH 比值、游离雄激素指数（free androgen index，               1.2.5  苏木素⁃伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色
              FAI）=TT × 100/SHBG，采 用 稳 态 模 型（homeostasis        观察各组小鼠卵巢组织形态学变化
              model assessment，HOMA）计 算 胰 岛 素 抵 抗 指 数                卵巢组织切片，于温箱中烘烤2 h，二甲苯脱蜡、
             （HOMA ⁃ insulin resistance，HOMA ⁃ IR）=（FBG ×       梯度酒精水化、HE 染色、中性树胶封片、晾干后在
              FINS）/22.5。                                       白光显微镜下观察各组卵巢组织形态并采集相应
              1.2.3  实验动物分组与模型建立                                图像。
                  20 只 3 周龄健康雌性 C57BL/6 小鼠 SPF 级购自              1.2.6  小鼠血清中25（OH）D、性激素及糖脂代谢指

              南京医科大学实验动物中心［许可证编号 SCKK                           标检测
             （苏）2021⁃0001］。在温度 25 ℃、湿度（50 ± 5）%、                     小鼠血清中 25（OH）D 水平由杭州佰辰医学检
              光照/黑暗为12 h/12 h的环境中常规饲养，本实验方                      验所运用质谱法检测；小鼠血清TT、TC、TG、HDL⁃C、
              案经过南京医科大学实验动物福利伦理委员会审                             LDL⁃C 均由北京北方生物技术研究所有限公司测
              查批准（编号：IACUC⁃2007007）。小鼠适应性喂养                     定；血糖由血糖仪检测；ELISA 法检测各组小鼠血
              1 周后，随机分为正常对照组（control，CTR 组）、                    清 FSH、LH水平，按照 ELISA 检测试剂盒说明书操
              PCOS组、VD缺乏组（VD 组）、VD缺乏联合PCOS组                     作步骤，使用酶标仪测量波长450 nm处各孔吸光度
                                    -
             （VD +PCOS 组）（每组各 5 只），分别予标准饲料或                     值，标准曲线下计算各样品含量。
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