Page 24 - 南京医科大学学报自然科学版

第43卷第8期
·1058 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2023年8月

现，实验组的小鼠大脑、心脏、肺、肝脏、脾脏、肾脏 进行每天注射他莫昔芬（100 mg/kg）花生油，对照
的器官重量和对照组差别无统计学意义（P > 0.05）， 组注射等量的花生油，连续注射 7 d，注射结束第
而胸腺、脾脏和睾丸的重量明显下降（P < 0.05，图 35 天小鼠各组织器官取材，PCR琼脂糖凝胶电泳和
2D），并且小鼠睾丸体重比也明显下降（图2E）。 Western blot结果显示，胸腺、心脏、肝脏、脾脏、睾丸
为了探究他莫昔芬诱导敲除 Pum1 对个体生 的 Pum1 敲除效率约为 50%，脑组织敲除率依旧较
殖器官的影响，对他莫昔芬注射结束第21天的小鼠 低（图 4A、B）。对睾丸的病理组织切片免疫组化和
（6 周）睾丸进行固定组织切片，HE染色发现实验组 HE染色没有发现明显的精子发生异常（图4C、D）。
小鼠精子形成发生障碍，睾丸中无长形精子，部分生
3 讨 论
殖细胞丢失（图3B）。为了进一步探究精子发生障碍
的原因，从对照组和实验组小鼠的睾丸中分别取3个 哺乳动物中 Pumilio 蛋白 Pum1 和 Pum2 在功能
不连续截面，通过BrdU和TUNEL实验对睾丸内的生 上存在着冗余，Pum2 小鼠除了体积和器官减小，
-/-
［5］
精细胞进行了增殖和凋亡检测，同时对每个截面中的 并无其他明显表型 ，因此本研究利用R26⁃CreER T2
-/-
BrdU/TUNEL 阳性细胞数目计数发现，实验组 BrdU 诱导敲除模型对出生后Pum2 小鼠进行Pum1诱导
阳性细胞比例与对照组相比显著降低，实验组睾丸生 性敲除，直接探究Pumilio缺失对出生后小鼠体型及
殖细胞凋亡数量与对照组相比显著增加（图3C、D）。 功能的影响。实验组 3 周龄小鼠大脑、心脏、肝脏、

2.2 成年小鼠Pumilio诱导敲除后未见明显异常 肺、肾脏的器官重量无明显异常，而胸腺、脾脏和睾
-/-
T2 flox/flox Pum2 小鼠实验组 丸的重量明显下降。睾丸中的Pum1敲除效率约为
成年 R26⁃CreER Pum1
A
大脑 小脑 胸腺 肝脏 睾丸 皮肤 尾巴
21 d - + + - + + - + + - + + - + + - + + - + + 他莫昔芬
557 bp
453 bp

280 bp
Pum2 -/-
B
21 d 3 d
大脑 小脑 胸腺 心脏 肝脏 睾丸 大脑 小脑 胸腺 肝脏 睾丸
- + - + - + - + - + - + - + - + - + - + - + 他莫昔芬
-150 kDa
Pum1
-75 kDa
Gapdh -37 kDa

C D E
2.0 * 对照组 1 000 8 **
他莫昔芬组 900 对照组（n=2） （ ‰ ） 6
mRNA 相对表达水平 1.5 *** *** * ** 器官重量 800 他莫昔芬组（n=3） 4
700
300
1.0
Pum1 0.5 200 * * ** 睾丸体重比 2
100
0.0 0 0
对照组
大脑 小脑 胸腺 肝脏 睾丸 大脑 胸腺 心脏 肺 肝脏 脾脏 肾脏 睾丸 （n=2） 他莫昔芬组
（n=3）
A：3周小鼠注射他莫昔芬后第3天和第21天Pum1在大脑、小脑、胸腺、肝脏、睾丸、皮肤和尾巴的DNA水平得到有效敲除，以及Pum2 鼠
-/-
尾PCR凝胶图；B：3周小鼠注射他莫昔芬后第21天和第3天Pum1蛋白水平得到有效敲除；C：3周小鼠注射他莫昔芬后第3天在小脑（P=0.000 1）、
胸腺（P=0.000 4）、肝脏（P=0.012 20）和睾丸（P=0.003 4）中的 Pum1 的 mRNA 的水平明显下降；D：3 周小鼠注射他莫昔芬后第 3天的大脑（P=
0.169 9）、心脏（P=0.261 7）、肺（P=0.300 8）、肝脏（P=0.485 0）、肾脏（P=0.318 5）的器官重量和对照组差别无统计学意义，而胸腺（P=0.025 9）、脾脏
（P=0.045 8）、睾丸（P=0.004 2）的重量明显下降；E：3周小鼠注射他莫昔芬后3 d睾丸体重比明显下降（P=0.001 9）。两组比较，P＜0.05，P＜0.01，
*
**
P＜0.001。
***
图2 3周小鼠他莫昔芬注射结束后PUM1的敲除效率及主要器官重量变化
Figure 2 The knockout efficiency of PUM1 and organ weight of 3 week⁃old mice were presented after the tamoxifen injec⁃
tion