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第44卷第1期 肖心儒,范 亮,施宇佳,等. A2M在慢性阻塞性肺疾病中的表达及其与免疫细胞浸润的
2024年1月 相关性[J]. 南京医科大学学报(自然科学版),2024,44(01):001-011,059 · 5 ·
表2 不同EOS水平COPD患者的临床特征
Table 2 Clinical characteristics of COPD patients with different EOS levels
Clinical characteristics EOS<300 cells/μL(n=17) EOS≥300 cells/μL(n=8) Statistic P
Gender[n(%)] χ =0.003 0.958 *
2
Male 15(88.2) 7(87.5)
Female 02(11.8) 1(12.5)
Age(years,x ± s) 68.12 ± 10.62 67.88 ± 9.340 t=-0.055 0.956 *
BMI(kg/m ,x ± s) 24.09 ± 2.910 23.52 ± 3.380 t=-0.434 0.668 *
2
Smoking history[n(%)] χ =2.056 0.152 *
2
Yes 10(58.8) 7(87.5)
No 07(41.2) 1(12.5)
FEV1/FVC(x ± s) 50.27 ± 11.10 45.37 ± 10.16 t=-1.056 0.302 *
FEV1%pred(x ± s) 57.47 ± 19.81 52.92 ± 18.10 t=-0.550 0.587 *
FeNO(ppb,x ± s) 22.18 ± 8.630 31.85 ± 10.07 t=2.480 0.021 *
GOLD stage[n(%)] 0.933 *
Ⅰ(FEV1% pred ≥80%) 03(17.6) 1(12.5) - -
Ⅱ(50%≤FEV1% pred < 80%) 08(47.1) 4(50.0) - -
Ⅲ(30%≤FEV1% pred < 50%) 05(29.4) 2(25.0) - -
Ⅳ(FEV1% pred < 30%) 1(5.9) 1(12.5) - -
*
EOS:eosinophil;FeNO:fraction of exhaled nitric oxide. Fisher exact test.
CD8 T 细胞、激活的自然杀伤(natural killer,NK)细 此指标作为COPD生物标志物的诊断价值最佳。
+
胞、M2 巨噬细胞在 COPD 患者肺组织中异常下调, 2.6 A2M与免疫细胞的相关性
而M0巨噬细胞上调(图2B)。此外,通过Pearson相 进一步验证 25 例 COPD 患者外周血中 A2M 蛋
关分析发现A2M与M0巨噬细胞呈负相关,与M2巨 白水平与免疫细胞的相关性(表 3)。结果显示,
噬细胞和静息肥大细胞呈正相关(图2C)。 A2M 与 LYM(图 5A)和 MONO(图 5B)呈正相关(P <
2.4 A2M与COPD免疫相关通路 0.05),与NEU、EOS、BASO、中性粒细胞/淋巴细胞比
利用 GSVA 和 ssGSEA 评估正常样本和 COPD 值(neutrophil⁃lymphocyte ratio,NLR)、单核细胞/淋
样本之间KEGG富集通路以及免疫相关通路的差异 巴细胞比值(monocyte⁃lymphocyte ratio,MLR)无明
(图3A、B),共获得184个KEGG 通路评分矩阵。各 显相关。我们前期研究表明 A2M 与肺功能相关 ,
[9]
通路在不同亚组中的不同评分提示COPD患者与健 因此,本研究进一步分析了GOLD Ⅰ~Ⅱ级和GOLD
康人之间各通路活性存在差异,这可能是决定 Ⅲ~Ⅳ级中 A2M 与 COPD 患者免疫细胞的相关性
COPD 发生发展的重要因素。此外,Pearson 相关分 (表4),结果显示,在GOLD Ⅰ~Ⅱ级中A2M与MONO
析揭示了 A2M 基因和富集分子途径之间的相关性 呈正相关。同时,EOS关系到COPD稳定期的治疗,
(图 3C),结果显示,A2M 与凋亡、B 细胞受体通路、 我们分析了 EOS ≥300 个/μL 组和 EOS < 300 个/μL
趋化因子通路、细胞因子⁃细胞因子受体相互作用及 组中 A2M 与 COPD 患者免疫细胞的相关性(表 4),
NK细胞介导的细胞毒性呈负相关。 结果显示,EOS < 300个/μL组中A2M与MONO呈正
2.5 COPD患者与健康对照组外周血中A2M的表达 相关,与EOS呈负相关,EOS≥300个/μL组中A2M与
RT⁃qPCR结果显示,与对照组相比,A2M mRNA LYM呈正相关,与MLR呈负相关。
在 COPD 患者外周血有核细胞中表达明显降低(图 2.7 A2M 与巨噬细胞 Raw264.7 细胞向 M2 型极化
4A),ELISA 实验结果显示,COPD 患者外周血血浆 的相关性
A2M 的蛋白表达较对照组下降(图 4B)。ROC 曲线 与正常巨噬细胞相比,IL⁃4和IL⁃13共刺激组的
评估A2M作为COPD生物标志物的价值(图4C),当 M2型巨噬细胞表面标志物Arg⁃1表达升高(图6A),
界 值(cut ⁃ off value)为 5.495 时 ,A2M mRNA 作 为 提示 M2 型巨噬细胞诱导成功。在 M2 型巨噬细胞
COPD 生物标志物的灵敏度为 92.0%,特异度为 中敲低A2M后,A2M mRNA表达降低(图6B),且M2
61.5%,AUC为0.815(95%CI:0.698~0.932,P < 0.001), 型巨噬细胞表面标志物Arg⁃1表达降低(图6C)。