Page 20 - 南京医科大学学报自然科学版
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第44卷第1期
· 14 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年1月
呼吸暂停时的缺氧情况,且 2 min 循环 1 次的模 孵育 30 min,然 后 加 入 1 μg 未 稀 释 CD133 抗 体
式,达到了睡眠呼吸暂停低通气指数≥30 次的重 4 ℃孵育 1 h,因本实验所用 CD133 抗体非荧光抗
度 OSAHS 诊断标准。IH 组大鼠每日循环 8 h 后取 体,故再加入 1 μg CD133相对应的二抗(FITC标记
出,置于正常空气环境下饲养,连续间歇性缺氧6周, 山羊抗兔 IgG)4 ℃孵育 30 min,随后加入 1 mL PBS
共 42 d。 上机检测。
1.2.2 大鼠胸主动脉HE染色 1.3 统计学方法
使用 3%戊巴比妥钠(30 mg/kg)对大鼠进行 本研究中计数资料用均数±标准差(x ± s)表示,
腹腔注射麻醉,进行心脏穿刺取血,每只大鼠取约 使用 R 语言统计分析与可视化软件(3.6.3 版本),
5 mL 全血,置于 4 ℃冰箱内待下一步检测;开胸将 R 包:stats(4.2.1版本)、ggplot2(3.3.3版本)进行数据
大鼠胸主动脉剥离,截取胸主动脉,分离好的组织 统计与作图分析,使用 Shapiro⁃Wilk 检验进行正态
用预冷的 PBS 将表面冲洗干净,固定、脱水、透明、 性检验,独立样本t检验进行组间差异比较,P < 0.05
渗透、包埋、切片、脱蜡、复水、染色后用中性树胶 为差异具有统计学意义。
封存。在光镜下观察大鼠胸主动脉的病理改变,并
2 结 果
测量平均动脉内中膜厚度(intima⁃media thickness,
IMT)。 2.1 CIH大鼠胸主动脉内中膜增厚
1.2.3 HDL⁃C、LDL⁃C、TG、TC、Hcy水平检测 经过 6 周的间歇性缺氧暴露后,取大鼠胸主
取大鼠全血 3 000 r/min 离心 15 min,分离血清 动脉切片做 HE 染色,IH 组病理切片中未见动脉
后,通过ELISA法检测HDL⁃C、LDL⁃C、TC、TG及Hcy。 斑块及脂质空泡(图 1A),胸主动脉内中膜厚度 IH
1.2.4 流式细胞术检测 组[(121.275±30.896)μm]对 比 RA 组[(84.075±
取大鼠全血裂红后进行流式双标检测 Tang 及 7.452)μm]显著增厚(P < 0.01,图1B)。
EPC 占单个核细胞(mononuclear cell,MNC)比例, 2.2 CIH大鼠Hcy、TC、TG、HDL⁃C、LDL⁃C水平改变
检测指标分别为 CD3 CD31 和 CD34 CD133 。调 使用 ELISA 方法测定大鼠血清中 Hcy、TC、TG、
+
+
+
+
整细胞悬液浓度至1×10 个/mL,取样本1 mL分别加 HDL⁃C、LDL⁃C水平。IH组比RA组Hcy水平显著升
6
入1 μg未稀释 CD3、CD31 抗体置于4 ℃孵育30 min, 高(P < 0.05,图 2A)。TG、HDL⁃C、LDL⁃C、TC 水平,
加入 1 mL PBS 上机检测 Tang 水平;另外,再取 1× IH 组对比 RA 组差异均无统计学意义(P > 0.05,
6
10 个/mL 的细胞样本1 mL加入1 μg CD34抗体,4 ℃ 图2B~E)。
A RA IH B P=0.005
( μm ) 160
140
Thoracic aorta IMT 120
100
80
60
RA IH
A:HE staining for aorta in the two groups(×50). B:Comparison of thoracic aortic intima⁃media thickness in the two groups(n=8).
图1 间歇性缺氧暴露可导致大鼠胸主动脉内中膜增厚
Figure 1 Intermittent hypoxia exposure caused a thickening of thoracic aorta IMT in rats
2.3 CIH大鼠Tang水平显著升高
3 讨 论
与 RA 组 相 比 ,IH 组 Tang/MNC 比 值 增 高
[(22.975±1.866)% vs.(15.713±1.746)%],差异具 作为动脉粥样硬化的独立危险因素,长期 CIH
[6]
有统计学意义(P < 0.001,图3A、B);IH组EPC/MNC 暴露会导致动脉粥样硬化斑块的产生 。动脉粥样
的比值增高[(0.040±0.028)% vs.(0.028±0.012)%], 硬化病变通常是从动脉内膜开始,经过脂质和复合
但差异无统计学意义(P > 0.05,图3C、D)。 糖类沉积、内皮损伤及血小板聚集、血栓形成,进而