Page 20 - 南京医科大学学报自然科学版
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第44卷第1期
· 14 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年1月
呼吸暂停时的缺氧情况，且 2 min 循环 1 次的模 孵育 30 min，然 后 加 入 1 μg 未 稀 释 CD133 抗 体
式，达到了睡眠呼吸暂停低通气指数≥30 次的重 4 ℃孵育 1 h，因本实验所用 CD133 抗体非荧光抗
度 OSAHS 诊断标准。IH 组大鼠每日循环 8 h 后取 体，故再加入 1 μg CD133相对应的二抗（FITC标记
出，置于正常空气环境下饲养，连续间歇性缺氧6周， 山羊抗兔 IgG）4 ℃孵育 30 min，随后加入 1 mL PBS
共 42 d。 上机检测。
1.2.2 大鼠胸主动脉HE染色 1.3 统计学方法
使用 3%戊巴比妥钠（30 mg/kg）对大鼠进行 本研究中计数资料用均数±标准差（x ± s）表示，
腹腔注射麻醉，进行心脏穿刺取血，每只大鼠取约 使用 R 语言统计分析与可视化软件（3.6.3 版本），
5 mL 全血，置于 4 ℃冰箱内待下一步检测；开胸将 R 包：stats（4.2.1版本）、ggplot2（3.3.3版本）进行数据
大鼠胸主动脉剥离，截取胸主动脉，分离好的组织 统计与作图分析，使用 Shapiro⁃Wilk 检验进行正态
用预冷的 PBS 将表面冲洗干净，固定、脱水、透明、 性检验，独立样本t检验进行组间差异比较，P < 0.05
渗透、包埋、切片、脱蜡、复水、染色后用中性树胶 为差异具有统计学意义。
封存。在光镜下观察大鼠胸主动脉的病理改变，并
2 结 果
测量平均动脉内中膜厚度（intima⁃media thickness，
IMT）。 2.1 CIH大鼠胸主动脉内中膜增厚
1.2.3 HDL⁃C、LDL⁃C、TG、TC、Hcy水平检测 经过 6 周的间歇性缺氧暴露后，取大鼠胸主
取大鼠全血 3 000 r/min 离心 15 min，分离血清 动脉切片做 HE 染色，IH 组病理切片中未见动脉
后，通过ELISA法检测HDL⁃C、LDL⁃C、TC、TG及Hcy。 斑块及脂质空泡（图 1A），胸主动脉内中膜厚度 IH
1.2.4 流式细胞术检测 组［（121.275±30.896）μm］对 比 RA 组［（84.075±
取大鼠全血裂红后进行流式双标检测 Tang 及 7.452）μm］显著增厚（P < 0.01，图1B）。
EPC 占单个核细胞（mononuclear cell，MNC）比例， 2.2 CIH大鼠Hcy、TC、TG、HDL⁃C、LDL⁃C水平改变
检测指标分别为 CD3 CD31 和 CD34 CD133 。调 使用 ELISA 方法测定大鼠血清中 Hcy、TC、TG、
+
+
+
+
整细胞悬液浓度至1×10 个/mL，取样本1 mL分别加 HDL⁃C、LDL⁃C水平。IH组比RA组Hcy水平显著升
6
入1 μg未稀释 CD3、CD31 抗体置于4 ℃孵育30 min， 高（P < 0.05，图 2A）。TG、HDL⁃C、LDL⁃C、TC 水平，
加入 1 mL PBS 上机检测 Tang 水平；另外，再取 1× IH 组对比 RA 组差异均无统计学意义（P > 0.05，
6
10 个/mL 的细胞样本1 mL加入1 μg CD34抗体，4 ℃ 图2B~E）。
A RA IH B P=0.005
（ μm ） 160
140
Thoracic aorta IMT 120
100
80
60
RA IH
A：HE staining for aorta in the two groups（×50）. B：Comparison of thoracic aortic intima⁃media thickness in the two groups（n=8）.
图1 间歇性缺氧暴露可导致大鼠胸主动脉内中膜增厚
Figure 1 Intermittent hypoxia exposure caused a thickening of thoracic aorta IMT in rats
2.3 CIH大鼠Tang水平显著升高
3 讨 论
与 RA 组 相 比 ，IH 组 Tang/MNC 比 值 增 高
［（22.975±1.866）% vs.（15.713±1.746）%］，差异具 作为动脉粥样硬化的独立危险因素，长期 CIH
［6］
有统计学意义（P < 0.001，图3A、B）；IH组EPC/MNC 暴露会导致动脉粥样硬化斑块的产生 。动脉粥样
的比值增高［（0.040±0.028）% vs.（0.028±0.012）%］， 硬化病变通常是从动脉内膜开始，经过脂质和复合
但差异无统计学意义（P > 0.05，图3C、D）。 糖类沉积、内皮损伤及血小板聚集、血栓形成，进而
