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第44卷第10期 陈 露，张静静，时 坚，等. S100A4核定位在胰腺癌转移中的作用与机制研究［J］.
2024年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（10）：1323-1336，1434 ·1331 ·

A B
IP: IgG S100A4 JASSA：
25 kDa— SUMO1⁃S100A4 Results for putatifs SUMO sites
Position Best Consensus direct Consensus inverted
IB 25 kDa— SUMO2/3⁃S100A4 K Sequence PS Type PSd DB Hit Type PSi DB Hit
10 kDa— S100A4 K7 ----MACPLEKALDVMVSTFH None None None None None
K18 ALDVMVSTFHKYSGKEGDKFK None None None None None
Input
K22 MVSTFHKYSGKEGDKFKLNKS None None None 1 None None 1
10 kDa— S100A4 K26 FHKYSGKEGDKFKLNKSELKE None None None None None
K28 KYSGKEGDKFKLNKSELKELL None None None None None 2
K31 GKEGDKFKLNKSELKELLTRE None None None None None
40 kDa— β⁃actin
K35 DKFKLNKSELKELLTRELPSF None None None 1 None None 1
K48 LTRELPSFLGKRTDEAAFQKL None None None None None
K57 GKRTDEAAFQKLMSNLDSNRD None None None None None
K96 CNEFFEGFPDKQPRKK----- None None None 1 None None 1
K100 FEGFPDKQPRKK--------- None None None None None
K101 EGFPDKQPRKK---------- None None None None None
SUMOplot：
001 MACPLEKALD VMVSTFHKYS GKEGDKFKLN KSELKELLTR ELPSFLGKRT Motifs with high probability
051 DEAAFQKLMS NLDSNRDNEV DFQEYCVFLS CIAMMCNEFF EGFPDKQPRK Motifs with low probability
101 K Overlapping Motifs
No. Pos. Group Score No. Pos. Group Score
1 K22 FHKYS GKEG DKFKL 0.5 2 K96 FEGFP DKQP RKK 0.39
C
Amino acid sequences
22 EF⁃hand 96

Homo sapiens LEKALDVMVSTFHKYSGKEGDKFKLNKSELKELL CIAMMCNEFFEGFPDKQPRKK
Mus musculus LEEALDVIVSTFHKYSGKEGDKFKLNKTELKELL CIAMMCNEFFEGCPDKQERKK
Bos taurus LEKALDVMVSTFHKYSGKEGDKFKLNKSELKELL CIAMMCNEFFEGFPDKQPRKK
Equus caballus LEKALDVMVSTFHKYSGKEGDKFKLNKSELKELL CIAMMCNEFFEGFPDKQPRKK
Sus scrofa LEKALDVMVSTFHKYSGKEGDKFKLNKSELKELL CIAMMCNEFFEGFPDKQPRKK
D E IP: IgG HA
IB 25 kDa— SUMO1⁃S100A4
Input
10 kDa— HA⁃S100A4
40 kDa— β⁃actin
Flag⁃SUMO1： - + + + +
Normal S100A4 Mutant S100A4 HA⁃S100A4： pcDNA3.1 K22R K96R DKR
WT

A：Detection of endogenous S100A4 SUMOylation. Immunoprecipitation was performed with IgG or anti⁃S100A4 antibody，followed by Western
blotting with anti⁃SUMO1 or anti⁃SUMO2/3 antibodies. B：Results predicted by JASSA and SUMOplot. Lysine residues 22 and 96 were identified as pos⁃
sible SUMO⁃modified binding sites. C：Sequence alignment of S100A4 homologues in different species，with potential SUMO modification sites（K22 ver⁃
sus K96）indicated in yellow. D：The 3D protein structure of wild type and double mutant DKR⁃S100A4 predicted by website. E：Changes in S100A4
SUMOylation in cells transfected with HA⁃S100A4 wild⁃type（WT），HA⁃S100A4⁃K22R，HA⁃S100A4⁃K96R，and HA⁃S100A4⁃DKR.
图4 S100A4的SUMO化修饰位点
Figure 4 SUMOylation sites of S100A4

在转录起始位点（transcription start site，TSS）上游， Peak 上具有特异性的短序列Motif 并分析这些Motif
说明 S100A4 在基因组上的结合位点富集于转录启 对应的转录因子的结合位点，发现 TWIST2（bHLH）
动区（图8A~C）。对S100A4⁃DKR和WT在基因组上 （14.62%，q=0.0274）、BMAL1（bHLH）（13.90%，q=
的结合差异基因位点进行GO和KEGG富集分析，结 0.0416）、c ⁃ Myc（bHLH）（10.21% ，q=0.0006）、p53
果表明，CUT&Tag 测序中的 S100A4 参与调控的基 （p53）（8.62%，q=0.0485）、AP⁃2γ（AP2）（7.80%，q=
因在与肿瘤转移相关的多种信号通路中富集（图 0.0419）、MNT（bHLH）（7.57%，q=0.0028）等转录因
8D、E），如划痕愈合、焦点黏附、肌动蛋白细胞骨架 子对应的 Motif 占总序列百分比较高（表 2）。这些

调节、Wnt 信号通路、细胞黏附分子（cell adhesion 转录因子与肿瘤转移的恶性生物学行为密切相
molecule，CAM）、细胞外基质受体相互作用等，提示 关，提示 S100A4 可能通过与这些转录因子相互作
S100A4 在人类胰腺癌进展中的关键作用。寻找 用，进而参与转移相关基因的转录调控，提高 PC