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第44卷第10期
               ·1330 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2024年10月


                                  表1 组织芯片中S100A4蛋白水平的表达与PC患者临床病理参数的分析
                 Table 1 The analyses between S100A4 protein expression on tissue microarray and clinicopathological parameters of
                        patients with PC                                                              ［n（%）］

               Clinical pathological  CasesS100A4 protein expression  Clinical pathological  CasesS100A4 protein expression
                                                         P                                                 P
                   parameter   （n）      Low     High                parameter    （n）     Low     High
               Sex                                     0.215    T stage                                  0.022 *
                 Male            37   16（43.2） 21（56.8）           T1，T2，T2-3      25   17（68.0） 08（32.0）
                 Female          29   17（58.6） 12（41.4）           T3              41   16（39.0） 25（61.0）
                                                                                                             *
               Age                                     0.218    N stage                                  0.005
                 ≤65 years       31   18（58.1） 13（41.9）           N0              41   26（63.4） 15（36.6）
                 >65 years       35   15（42.9） 20（57.1）           N1              25   07（28.0） 18（72.0）
               Grade                                   0.618    M stage                                  0.292
                 Ⅰ-Ⅱ & Ⅱ         38   18（47.4） 20（52.6）           M0              62   30（48.4） 32（51.6）
                 Ⅱ-Ⅲ& Ⅲ          28   15（53.6） 13（46.4）           M1              04   03（75.0） 01（25.0）
               Tumor location                          0.323    Clinical stage                           0.067
                 Head            36   20（55.6） 16（44.4）           1A/1B           14   10（71.4） 04（28.6）
                 Body/tail       30   13（43.3） 17（56.7）           2A/2B/4         52   23（44.2） 29（55.8）
                                                                Total             66   33（50.0） 33（50.0）
                                        *
                                    2
                 Significance estimated with χ test，P < 0.05.
              样地，SENP1 与 S100A4 也存在相互作用（图 5B）。                  内源性 S100A4 表达的稳转细胞株，并进一步调控
              此外，在 MIA PaCa⁃2 细胞中过表达 UBC9 时 SUMO⁃               S100A4的 SUMO化修饰酶，设立多个实验分组，建立
              S100A4增加，相反，SENP1过表达会减弱S100A4的                    体外研究模型，观察PC细胞的体外转移能力的变化。
              SUMO 化修饰（图 5C）。上述结果表明，PC 细胞中                           与对照组相比，外源性表达S100A4野生型的细
              S100A4 蛋白的 SUMO 化与去 SUMO 化修饰动态平                   胞划痕愈合能力增强，而表达突变型 S100A4⁃DKR
              衡过程是SUMO化相关酶介导的一系列酶促反应。                           的细胞迁移距离与对照组的差异无统计学意义。
                  鉴于SUMO化在调节靶蛋白细胞定位的重要作                         在 转 染 各 型 S100A4 基 础 上 分 别 敲 低 UBC9 和
              用 ［18］ ，为确定SUMO化修饰是否影响S100A4在胰腺                   SENP1，敲低 UBC9 可部分逆转表达野生型 S100A4
              癌细胞中的核定位，本课题组通过基因调控 UBC9                          所带来的增益效果，而在转染 S100A4⁃DKR 的突变
              和 SENP1 构 建 了 SUMO 化 程 度 不 同 的 细 胞 和              组中，细胞愈合能力虽有降低，但差异无统计学意
              S100A4 突变细胞。然后对不同细胞分组进行核质                         义。敲低 SENP1 后发现，表达野生型 S100A4 的细
              分离从而检测 S100A4 蛋白在胞核与胞质中的比                         胞迁移能力明显增强，而 S100A4⁃DKR 突变型细胞
              例。与对照组相比，shUBC9 细胞中，SUMO 化的                       的愈合能力差异无统计学意义（图 7A、C）。以上
              S100A4 减少（图 5A），S100A4 核表达减少，而胞质                  结果提示，S100A4 SUMO 修饰增强，细胞运动能力
              比例增加（图 6A）；相反，敲低 SENP1 后 S100A4 的                 提高，促进细胞划痕愈合；S100A4⁃DKR 由于 SUMO
              SUMO修饰增加（图5A），核内S100A4的量也相应增                      位 点 突 变 ，调 控 SUMO 相 关 酶 的 表 达 无 法 改 变
              加（图6A）。同时，转染第22、96位S100A4 SUMO化                   S100A4⁃DKR 的 SUMO 修饰水平，故细胞迁移距离
              修饰位点同时突变（S100A4⁃DKR）的细胞胞核内的                       没 有 明 显 改 变 。 侵 袭 实 验 结 果 也 同 样 表 明
              S100A4比例（图6B）及其SUMO化修饰明显减少（图                      S100A4 SUMO化修饰程度会影响细胞转移能力（图
              4E），而 K22R 或 K96R 单位点突变的细胞株细胞核                    7B、D）。
              中的 S100A4 比例则略减少（图 6B），提示 SUMO 化                  2.4  S100A4核定位参与调控肿瘤转移功能相关的
              修饰可促进S100A4核定位分布。                                 基因网络

              2.3  调控 S100A4 蛋白的 SUMO 化修饰能改变胰腺                       为了进一步探究S100A4在PC细胞核内影响了
              癌细胞的体外转移能力                                        哪些与转移功能相关的基因转录，使用抗S100A4抗
                  在前两部分实验结果的基础上，本课题组进一                          体 对 S100A4 ⁃ DKR 和 WT 的 胰 腺 癌 细 胞 株 进 行
              步在PC细胞株（MIA PaCa⁃2与PANC⁃1）中构建敲低                   CUT&Tag测定。数据显示，CUT&Tag信号主要分布
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