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第44卷第11期 刘雨桐，张 何，蔡皓然，等. mfat⁃1转基因小鼠通过促进神经干细胞增殖修复缺氧缺血性脑损伤［J］.
2024年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（11）：1483-1490 ·1487 ·

小鼠具有较轻的神经功能缺损以及更好的运动协
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 - +
600 bp- 调和维持平衡的能力。
500 bp- -438 bp
400 bp- WT+HIBD组小鼠左颈总动脉结扎，在8% O2和
A
37 ℃下缺氧50 min，小鼠结扎侧出现明显脑梗死区
域，WT sham 组与 mfat⁃1 sham 组未出现脑梗死。而
同窝 mfat⁃1 转基因小鼠同样条件进行造模之后，脑
B C
梗死体积显著减小（图 2C）。对梗死区域体积占总
A：The result of gel electrophoresis of F1 progeny mouse genotype
脑体积百分比进行统计。WT+HIBD 组及 mfat⁃1+
identification showed that the mfat⁃1 transgenic fragment amplified by
PCR was 438 bp. The“+”lane was the positive control. The“-”lane is HIBD组梗死区域体积占比分别为（31.48±3.52）%和
the negative control. M stands for DNA marker. B：Ligation the left common （16.07±2.52）%（P < 0.01，图2D）。该结果表明mfat⁃1
转基因小鼠HIBD后脑梗死程度明显降低。
carotidarteryofmiceforHIBDmodeling.C：Miceaftersuccessfulmodeling.
图1 mfat⁃1转基因小鼠基因型鉴定及HIBD模型的建立 2.3 mfat⁃1转基因小鼠神经干细胞增殖能力增强
Figure 1 Identification of mfat ⁃ 1 transgenic mice geno⁃
types and the establishment of HIBD model 免疫组织化学和定量分析显示，mfat⁃1+injured

A B C D
5 4 WT WT mfat⁃1 mfat⁃1 50 **
** **
sham HIBD sham HIBD
4 3 （%） 40
Longa score 3 2 Bederson score 2 Infarction volume 30

20
1 1 10

0 0 0
mfat⁃1 HIBD
WT sham WT HIBD mfat⁃1 sham mfat⁃1 HIBD WT sham WT HIBD mfat⁃1 sham WT sham WT HIBD mfat⁃1 sham
mfat⁃1 HIBD

**
**
A：Box plot of Longa scores for different groups（ P < 0.01，n=20）. B：Box plot of Bederson score for different groups（ P < 0.01，n=20）. C：Repre⁃
sentative images of TTC⁃stained cerebral coronal sections of WT sham group，WT HIBD group，mfat⁃1 sham group and mfat⁃1 HIBD group. D：Box
**
plot of quantitative assessment of cerebral infarction volume in each group（ P < 0.01，n=7）.
图2 HIBD造模后小鼠神经行为表现及脑组织TTC染色
Figure 2 Neurobehavioral performance of mice and TTC staining of adult mouse brain tissue post HIBD

side 组的 BrdU 阳性细胞较 WT+injured side 组明显 Nestin阳性，说明该细胞为神经干细胞（图4D~F）。
增多［（36.33±3.91）个 vs.（28.78±3.19）个，P < 0.01， 2.5 体外干细胞增殖能力的检测
图 3A、B］。表明mfat⁃1转基因小鼠神经干细胞的增 对体外培养的单层贴壁生长的神经干细胞进行
殖能力增强，这和 mfat⁃1 转基因小鼠大脑的损伤修 OGD/R 造模，利用 BrdU 抗体进行免疫荧光，荧光显
复能力提高密切相关。 微镜下观察并拍照（图5A），计算BrdU阳性细胞占总
2.4 神经干细胞体外培养系统的建立 细胞的比例（图5B）。定量分析表明，造模后野生型
取8~10周龄小鼠大脑，显微镜下分离出红色框 小鼠神经干细胞增殖能力较未造模组有所增强
内的 SVZ 部分（图 4A），剪碎，消化，去除胰酶后，加 ［（27.54±3.52）% vs.（73.00±4.82）%，P < 0.01］，mfat⁃1
入无血清培养基。12 d后，绝大部分组织细胞死亡， 转基因小鼠来源的神经干细胞在造模后增殖能力较
留下的细胞团即为神经干细胞球（图4B），在培养基 WT造模组增强［（61.83±4.83）% vs.（73.00±4.82）%，
中悬浮生长；把神经干细胞球处理为单个细胞移入 P < 0.01］，与小鼠的体内实验结果是一致的。
多聚赖氨酸和层黏连蛋白预处理的培养皿中，神经
3 讨 论
干细胞贴壁生长，形成单层细胞（图4C）。单层培养
的细胞使用 Nestin 这个神经干细胞的标记基因进 已有不少研究发现脑卒中以后侧脑室的脑室
行免疫荧光，结果显示分离培养的细胞大部分呈现 下带和海马的颗粒下带这两个成年哺乳动物脑内