Page 34 - 南京医科大学自然版
P. 34

第44卷第11期
               ·1500 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2024年11月


              and qRT⁃ PCR were performed to analyze the expression levels of LOX in human fibroblasts and mouse fibroblasts（L929）induced by
              paclitaxel. Results：High expression of LOX was significantly associated with the presence of tumors，poor treatment outcomes，and
              venous invasion in ovarian cancer. LOX was highly expressed in cancer associated fibroblasts in ovarian cancer. Silencing LOX led to
              the downregulation of cell adhesion molecule expression. Paclitaxel induced upregulation of LOX expression in fibroblasts. Knocking
              down LOX in fibroblasts increased the sensitivity of co⁃cultured fibroblasts and tumor cells to paclitaxel. Conclusion：High expression
              of LOX is associated with a poor prognosis in ovarian cancer，knocking down LOX in fibroblast may enhance the sensitivity of ovarian
              cancer to paclitaxel；the mechanism of LOX may linked to alterations in the expression of cell adhesion molecules in cancer⁃associated
              fibroblasts. Paclitaxel may upregulate the expression of LOX in fibroblasts.
             ［Key words］ lysyl oxidase；ovarian cancer；cell adhesion molecules；paclitaxel
                                                                          ［J Nanjing Med Univ，2024，44（11）：1499⁃1509］





                                                         ［1］
                  卵巢癌是常见且致命的妇科恶性肿瘤之一 。                          相关，且 LOX 高表达可促进卵巢癌的侵袭和转
              由于缺乏早期预警症状和有效的筛查及早期诊断方                            移 ［16］ 。但是LOX在卵巢癌组织中的表达模式及可能
              法，约 70%的病例在确诊时已为晚期，预后较差 。                         的作用机制等尚未明晰，化疗是否参与调控LOX表
                                                         ［2］
              卵巢癌的标准治疗方法是肿瘤细胞减灭术联合铂                             达也尚无研究。因此，本文主要探索LOX在卵巢癌组
                                          ［3］
              类、紫杉醇（paclitaxel，PTX）化疗 。然而，即使接受                  织中的表达特征及其表达与卵巢癌临床病理特征的相
              标准治疗，晚期卵巢癌患者的 5 年生存率仍然只有                          关性，并进一步分析其可能的上下游调控机制。
              30%左右 。大多数卵巢癌复发和死亡与获得性耐
                      ［4］
                                                                1  材料和方法
                                                         ［5］
              药有关，耐药已成为影响治疗效果的主要障碍 。
              因此，深入探索卵巢癌耐药因素是一项亟待解决的                            1.1  材料
              临床问题。                                             1.1.1 细胞
                  肿瘤微环境（tumor microenvironment，TME）在                 人源成纤维细胞分离自人早孕流产的胎盘。
                                                         ［6］
              肿瘤发生发展及耐药过程中均发挥着重要作用 。                            小鼠成纤维细胞 L929（苏州海星生物科技有限公
              TME 由肿瘤细胞、细胞外基质（extracellular matrix，             司），人卵巢癌细胞 A2780（南京凯基生物技术股份
              ECM）、分泌因子和肿瘤相关成纤维细胞（cancer⁃                       有限公司），OV⁃CAR3细胞（上海名劲生物科技有限
                                                         ［7］
              associated fibroblasts，CAF）和免疫细胞等组成 。             公司）。
              其中丰度最高的 CAF 可以通过调控 ECM 组分的合                       1.1.2 试剂
              成和/或蛋白降解以及基质螯合生长因子的释放进                                 DMEM高糖培养基、RPMI⁃1640培养基（江苏凯
              行 ECM 重塑，从而形成促进内皮细胞增殖、迁移和                         基生物技术股份有限公司）。优级胎牛血清（NEW⁃
              血管生成的微环境 ，同时，CAF 还可与 ECM 蛋白                       ZERUM 公司，新西兰）。Lipofectamine 3000、RNA
                               ［8］
              相互作用以支持侵袭性肿瘤生长和耐药，抑制 T 细                          提取纯化试剂盒、RIPA 裂解液、青/链霉素混合液、
                            ［9］
              胞的有效浸润等 。                                         0.25% Trypsin⁃EDTA（上海赛默飞世尔科技公司）。
                  赖氨酰氧化酶（lysyl oxidase，LOX）为一种胺氧                siRNA（上海吉玛制药技术有限公司）。卡铂（carbo⁃
              化酶，主要在平滑肌及成纤维细胞中表达，可促进                            platin，CBP）及 PTX（MedChemExpress 公司，美国）。
              胶原交联及纤维沉积          ［10］ 。LOX 已经被证实可以促             5%脱脂奶粉、TritonX⁃100（广州赛国生物科技有限
              进乳腺癌、肺癌、头颈癌、肝癌等多种癌症的发生发                           公司）。逆转录试剂盒、SYBR qRT⁃PCR Master Mix、
              展 ［11-12］ 。有文献报道，LOX 可促进 CAF 驱动的纤维                DAB 工作液（南京诺唯赞生物科技股份有限公
              胶原基质重塑和交联，从而促进胰腺癌细胞的侵                             司）。3% H2O2 （Sigma⁃Aldrich 公司，德国）。4%多聚
              袭 ［13］ 。另一方面，PTX 化疗可上调 T 细胞中 LOX 表                甲醛、苏木素染液（北京兰杰柯科技有限公司）。山
              达，促进 T 细胞介导的 ECM 重塑，从而促使肿瘤转                       羊血清（武汉博士德生物工程有限公司）。即用型
              移 ［14］ 。因此，靶向LOX治疗可能成为一种重要的肿                      DAPI、CCK8 试剂、柠檬酸钠抗原修复液、小鼠单克
              瘤治疗策略。                                            隆抗β⁃actin 抗体、小鼠单克隆抗 GAPDH 抗体、HRP
                  已有研究发现，LOX高表达与卵巢癌不良预后                   ［15］  标记的山羊抗兔 IgG、HRP 标记的山羊抗小鼠 IgG
   29   30   31   32   33   34   35   36   37   38   39