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第44卷第2期         周   慧，王   雁，李 华，等. 循环miR⁃124作为铅神经毒性标志物的灵敏性、稳定性和组织
                  2024年2月               特异性研究［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（2）：154-161                    ·155 ·


                by lead exposure with a more sensitive manner. Conclusion：Circulating miR⁃124 has good stability，tissue specificity and sensitivity，
                and can be used as a potential biomarker of evaluating lead neurotoxicity.
               ［Key words］ Circulating miR⁃124；biomarker validation；sensitivity；stability；tissuespecificity
                                                                              ［J Nanjing Med Univ，2024，44（02）：154⁃161］






                    铅是一种不能通过生物降解，可以在环境中持                              循环 miRNA 作为生物标志物用于临床需要完
                续存在的环境毒物。世界卫生组织于 2021 年发布                         成以下几个关键步骤，包括发现、证实、验证和临床
                的《世卫组织铅暴露临床管理指南》指出，铅暴露属                           应用  ［12］ ，目前对于循环miRNA作为生物标志物的研
                于重大公共卫生问题，2019年有90万人因长期受铅                         究大多处于发现和证实阶段。2018年，美国食品药
                暴露影响而死亡。当血铅浓度在 20~40 μg/dL 时，                     品监督管理局（food and drug administration，FDA）发

                人体即会出现相应的认知状态改变；当血铅浓度≥                            布的《生物标志物证据框架指南》中指出，生物标志
                                                       ［1］
                60 μg/dL 时，人体会有明显的神经毒性表现 。针                       物的认证需要经过分析验证和临床验证，分析验
                对 15~24 岁青少年的研究发现，当血铅浓度为 1.5~                     证指验证生物标志物检测的性能特征满足使用条
                10.0 μg/dL 时，出现行为障碍的可能性比血铅浓度                      件；临床验证指验证生物标志物与目标结果的相
                低于检测限（<0.7 μg/dL）时高8倍 。在中国，成人                     关性满足使用条件。FDA 同年发布的《生物分析
                                              ［2］
                血 铅 水 平 从 2000—2002 年 的 8.0 μg/dL 下 降 至           方法验证指南》指出，生物标志物的分析方法验证
                                       ［3］
                2016—2018 年的 2.2 μg/dL ，仍处于可能受铅暴露                 需要与药物分析的方法验证解决相同的问题，包
                影响的水平。儿童对铅暴露更敏感，任何水平的铅                            括阐明方法的准确性、灵敏性、选择性、重现性和
                暴露对儿童的发育都是不利的。目前，对于铅的暴                            稳定性等特征。
                露和风险评估主要依赖于血铅浓度，然而血中的铅                                miR⁃124在铅神经毒性中的研究尚处于发现和
                含量仅占人体铅负荷的 1%左右，大量的铅储存在                           证实阶段。本课题组主要研究循环miR⁃124作为铅
                软组织和骨骼中。具有相同血铅浓度的儿童面临                             神经毒性生物标志物的高敏感性和高组织特异性，
                的神经发育受损的风险也不一定相同。有研究报                             同时考察其在不同保存条件下的稳定性，对循环
                道，当血铅浓度处于 100~200 μg/dL 时，有儿童无中                   miR⁃124作为铅神经毒性效应标志物进行初步验证。
                                             ［4］
                毒症状，有儿童出现致命性脑病 。大脑是铅毒性
                                                                  1  材料和方法
                的主要靶器官之一，极少量的铅暴露就会导致一系列
                生理和行为功能障碍，因此寻找更加灵敏的生物标志                           1.1  材料
                物，及时评估铅暴露引起的神经毒性非常关键。                                 SPF级Sprague⁃Dawley（SD）大鼠（北京维通利华
                    循环微小核糖核酸（microRNA，miRNA）具有易                   实验动物技术有限公司），在恒温（20~26 ℃）、恒湿
                获取性、高特异性和高灵敏性等特点，可作为脏器                           （40%~70%）的环境中饲养，动物自由摄食和饮水。
                损伤的潜在生物标志物，如 miR⁃122 可作为药物性                       动物管理及使用申请经上海益诺思生物技术股份
                                               ［5］
                肝损伤的高度特异性的生物标志物 ，miR⁃107可作                        有限公司动物管理和使用委员会批准（伦理批文编
                                       ［6］
                为骨质疏松的生物标志物 ，循环 miR⁃19b⁃3p 是心                     号：IACUC⁃2021⁃r⁃048）。
                                       ［7］
                力衰竭的预后生物标志物 。在对铅作业工人研究                                醋酸铅（上海西格玛奥德里奇贸易有限公司）；
                                                           ［8］
                发现，铅暴露可以引起循环 miR⁃124 显著升高 。                       对乙酰氨基酚（上海易恩化学技术有限公司）；盐酸
                miR⁃124 是大脑中表达最多的 miRNA，高度特异性                     异丙肾上腺素注射液（重庆西南药业股份有限公
                                     ［9］
                地存在于中枢神经系统 ，靶向成年大脑25%~48%                         司）；硫酸庆大霉素注射液（焦作国药集团容生制药
                的总mRNA，其在人类、小鼠和大鼠中具有完全相同                          有限公司）；2，3，5⁃三苯基氯化四氮唑（2，3，5⁃triphe⁃
                的序列，序列高度保守          ［10］ 。研究发现，miR⁃124在脑          nyl tetrazolium chloride，TTC）（北京索莱宝科技有限
                卒中患者外周血中表达升高，且卒中后梗死体积越                            公司）；苏木素染液和伊红染液（珠海贝索生物技术
                大，miR⁃124浓度越高      ［11］ ，因此有望开发成为脑卒中              有限公司）；miScript SYBR Green PCR 试剂盒、
                                                                                     ®
                                                                                            ®
                的早期预测和风险分层的生物标志物。                                 miRNeasy Serum/Plasma Kit 试剂盒、miScriptⅡ逆转
                                                                           ®
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