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第44卷第2期 周 慧，王 雁，李 华，等. 循环miR⁃124作为铅神经毒性标志物的灵敏性、稳定性和组织
2024年2月 特异性研究［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（2）：154-161 ·159 ·

A 1.4 ** B a b
（ mg/kg） 1.2

1.0
Concentration 0.8 **
0.6
0.4
Pb 0.2
0.0 50 μm 50 μm
0 mg/kg 300 mg/kg 600 mg/kg
PbAc PbAc PbAc
C D E
0 mg/kg PbAc
0 mg/kg PbAc 300 mg/kg PbAc
0 mg/kg PbAc
12 300 mg/kg PbAc * 300 mg/kg PbAc ** 25 600 mg/kg PbAc
（ ng/g ） 10 * * * ** * * （ ng/g ） 120 600 mg/kg PbAc ** ** ** （ ng/g ） 20 * **
600 mg/kg PbAc
100
**
Level 8 6 Level 80 Level 15 ** ** ** **
*
60
10
IL⁃1β 4 2 TNF⁃α 40 IL⁃10 5
20
0 0 0
D8 D15 D22 D57 D8 D15 D22 D57 D8 D15 D22 D57
A：Lead exposure of brain tissues after administration of lead acetate at different dose levels. B：HE staining results of SD rat brain tissues（×200），
Ba：No obvious abnormality was noted in cerebral cortex of solvent control rats，Bb：Increased glial cells in cerebral cortex were noted in 300 mg/kg lead
acetate rats（black arrow）. C：Effect of lead acetate on IL⁃1β expression of SD rat brain tissues. D：Effect of lead acetate on TNF⁃α expression of SD rat
**
*
brain tissues. E：Effect of lead acetate on IL⁃10 expression of SD rat brain tissues. Compared with solvent control group，P < 0.05，P < 0.01（n=4）.
图3 建立醋酸铅神经毒性模型
Figure 3 Establish of lead acetate neurotoxicity models
使用的铅暴露生物标志物，然而血铅浓度只能反映 7 天即检测到循环 miR⁃124 升高，给药第 21 天检测
最近的铅暴露情况，铅暴露后在血液中的半衰期约 到循环细胞因子IL⁃1β和TNF⁃α升高，提示循环miR⁃
为30 d，随后进入大脑、肝脏和肾脏等具有高交换率 124 可以更早期、更灵敏地监测铅暴露引起的神经
的软组织隔室，并最终在硬组织隔室骨骼和牙齿中 炎症。
牢固结合并积累。在怀孕、更年期和钙缺乏等生理 尽管许多循环 miRNA 已经在不同的人群和疾
条件改变时，骨骼中的铅可以重新入血从而增加血 病条件下被证实，但迄今为止仍未用于临床，可归
［17］
液中的铅水平 ，并带来新的毒性风险。相同的血铅 因于样本类型、样本处理方法和检测平台等的差
浓度可能带来不同的神经毒性风险，因此血铅浓度结 异，导致研究之间存在不一致性和不可重复性。其
合效应生物标志物更有利于铅神经毒性的评价。 中，血液样品处理方法可能会影响循环miRNA的稳
理想的生物标志物优先在特定的组织中表达 定性，如肝素抗凝剂会影响 miRNA 检测，血清分离
且含量丰富，正常生理状况下体液中的浓度较低， 胶和其他抗凝剂（如EDTA和柠檬酸盐）不会显著影
组织损伤时生物标志物大量释放进入体液，通过检 响 miRNA 的检测等 ［19］ 。本研究选择了 EDTA⁃K2作
测体液中生物标志物的含量，诊断组织损伤情况。 为 miRNA 的抗凝剂。全血在室温孵育时间超过
［20］
miRNA 可以通过抑制蛋白翻译和促进 mRNA 切割 24 h，发现miRNA可能从血细胞或血小板中释放 ，
在转录后水平调控靶基因的表达 ［18］ ，因此miRNA水 因此选择在采血后2 h内对全血样本进行离心的处
平的改变通常会早于蛋白水平。本研究将大鼠暴 理条件。确定样品处理程序后，本研究建立大鼠
露于醋酸铅建立与铅暴露相关的神经毒性模型，同 MCAO 模型，按照以上样本处理程序处理血液样本
时检测了脑组织促炎细胞因子 IL⁃1β和 TNF⁃α以及 并检测循环miR⁃124的表达，通过与文献比对，认为
抗炎细胞因子IL⁃10，结果显示IL⁃1β和TNF⁃α升高、 样本处理程序和检测方法可靠。为了有效利用生
IL⁃10 降低，提示醋酸铅暴露引起了神经炎症，与文 物标志物获得有意义的结论，生物样本从采集到检
［8］
献报道一致 ；同时比较了检测到循环 miR⁃124 和 测过程中的保存至关重要，稳定性评估应涵盖研究
循环细胞因子的含量改变的时间，结果显示给药第 期间的样本处理和样本保存，如果为冷冻样品则需